【摘 要】
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目的 研究应用siRNA 沉默钠氢交换体1(NHE1)蛋白表达后对人U87 胶质瘤细胞系侵袭迁移能力的影响.方法 应用免疫组织化学染色的方法检测手术切除的人脑胶质母细胞瘤标本及对照正常脑组织标本中NHE1 的表达情况；应用NHE1 特异性siRNA 转染U87 胶质瘤细胞(siRNA-NHE1,n=3)敲低NHE1 的表达,并设立相应的阴性对照组(siRNA-NC,n=3),以及不做任何处理的空白
【机 构】
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新乡医学院第一附属医院 神经外科二病区 南京医科大学
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目的 研究应用siRNA 沉默钠氢交换体1(NHE1)蛋白表达后对人U87 胶质瘤细胞系侵袭迁移能力的影响.方法 应用免疫组织化学染色的方法检测手术切除的人脑胶质母细胞瘤标本及对照正常脑组织标本中NHE1 的表达情况；应用NHE1 特异性siRNA 转染U87 胶质瘤细胞(siRNA-NHE1,n=3)敲低NHE1 的表达,并设立相应的阴性对照组(siRNA-NC,n=3),以及不做任何处理的空白对照组(control 组,n=3).不同处理组中,通过western blot 及real-time PCR 验证三组中NHE1 蛋白及mRNA 的表达情况.Western blot 检测不同处理组中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、皮层肌动蛋白(cortactin)、磷酸化的皮层肌动蛋白(p-cortactin)的表达量,transwell 细胞侵袭实验和划痕实验分别检测胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力,细胞免疫荧光技术检测NHE1 在U87 胶质瘤细胞中的表达情况,荧光基质胶降解实验检测U87 细胞侵袭性伪足形成和基质胶降解能力.结果 免疫组化结果显示NHE1 在对照正常脑组织中表达呈弱阳性,而在胶质母细胞瘤中表达呈强阳性.siRNA 技术显著下调了U87 胶质瘤细胞系中NEH1 的mRNA 及蛋白的表达量,siRNA-NHE1 组、siRNA-NC 组与control 组中mRNA 的相对表达量分别为为0.23±0.05、0.98±0.06 和96.67±2.52(P<0.01)；三组中NHE1 蛋白的相对表达量分别为28.72％±2.36％、69.21％±3.92％及69.04％±3.57％(P<0.01)；与siRNA-NC 组及control 组相比较,siRNA-NHE1组中,MMP-2、MMP-9 及p-cortactin 表达水平显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01),cortactin 的表达量无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05).Tranwell 实验及划痕实验中胶质瘤细胞侵袭和迁移能力显著下降(P＜0.01),细胞免疫荧光染色中NHE1 富集于侵袭性伪足前端,敲低NHE1 表达后U87 侵蚀基质胶降解面积明显减少,侵袭性伪足形成显著减少.结论 NHE1 促进了胶质瘤细胞的侵袭迁移,并可能成为抵抗胶质瘤侵袭迁移的有效靶点.
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