【摘 要】
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根据CrenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因序列,设计1对包含完整ORF5基因序列的特异引物,利用RT-PCR技术扩增PRRSV GD-11分离株的ORF5基因,并对其进行序列测定,同时与已发表的13株PRRSV进行同源性比较。将扩增的PRRSV GD-11分离株的ORF5基因克隆到含msyB伴侣基因的可溶表达载pBCX上构建重组表达质粒。结果显示,扩增获得的DNA片段约为60
【机 构】
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广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广州,广东,510623 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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根据CrenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因序列,设计1对包含完整ORF5基因序列的特异引物,利用RT-PCR技术扩增PRRSV GD-11分离株的ORF5基因,并对其进行序列测定,同时与已发表的13株PRRSV进行同源性比较。将扩增的PRRSV GD-11分离株的ORF5基因克隆到含msyB伴侣基因的可溶表达载pBCX上构建重组表达质粒。结果显示,扩增获得的DNA片段约为603bp,与国内经典的CH-la株核苷酸同源性最高,为98.7％,氨基酸同源性为97.55。msyB-GP5重组表达质粒经双酶切后分为两个片段,大小与预期一致,表明已成功获得重组表达质粒。该基因的序列分析与重组表达质粒的成功构建,为对GP5蛋白的研究奠定基础。
其他文献
本研究选取牛分枝杆菌pncA基因、结核分枝杆菌mpt40特异序列，作为基因芯片检测的靶片段，设计和筛选特异引物及探针。将标记的探针点至醛基化基片，制备基因芯片。采用引物不对称比例法PCR技术为基础，扩增目的片段，然后将单链扩增产物与芯片杂交，杂交信号经扫描仪扫描后进行数据判读。实验结果显示：所设计引物能够将目的片段有效扩增，筛选出的2条探针对阳性质粒进行实验性检测，能够有效的将两者区分。该研究有望
为探求我区部分地区山羊副结核杆菌之感染情况，我们通过对发病地区的流行病学调查、病羊的临床症状观察、病理解剖、组织切片观察等均可见典型副结核病特征;实验室ELISA检测，结果为副结核病阳性;诊断为该地区发生副结核杆菌病疫情。根除此病，必须采取综合生物安全防控体系措施才行。
为制备抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体，以纯化的原核表达的牛重组边缘无浆体MSP5(rMSP5)免疫BALB/c鼠，应用常规杂交瘤技术获得2株能稳定分泌特异性单克隆杭体(MAb)的杂交瘤细胞系(1D8和2F3)。间接ELISA检测腹水效价分别为0.549×106和0.783×105，亚类鉴定结果分别为IgG2b和IgG2a，轻链均为κ型;ELISA叠加试验表明两株MAb识别的抗原位点相同或相近;W
猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)ORF2(开放阅读框2)基因编码其核衣壳蛋白,它含有导致病毒致病性的多个抗原决定簇位点。根据ORF2基因序列设计特异性引物,以感染PCV2的Dulac细胞冻融上清为模板,克隆该开放阅读框的全基因序列。然后以该重组质粒为模板,选择其异于PCV1的保守序列,设计PCR引物,采用两步法,建立了检测PCV2快速简捷的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。多次实验证明,该方法
猪圆环病毒2型(PCV2)是与猪的一种新的传染病-断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystetmicwasting syndrome,PMWS)密切相关,该病以进行性消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、发育迟缓及皮肤苍白等为主要特征。PCV-2广泛存在于世界很多的养猪国家和地区。到目前为止,还没有有效的疫苗来预防此疾病,因此PCV-2成了近几年国内外兽医领域关注的研究热点之一。
以重组腺病毒转移载体P-ORF2,P-γ-IFN为模板,应用Primer5.0设计了2对引物,其中一对引物P1,P2用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增,另一对引物P3,P4则用于γ-IFN基因的扩增。再以所扩增的2段基因为模板,P1,P4为引物扩增融合基因ORF2-γ-IFN。将所扩增的串联基因连接PMD-18T-Simple Vector,经PCR方法和限制性内切酶分析鉴定该串联基因已成功转入
感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。pSK-PCV2中含有一个线性化PCV2全基因组,长1767bp,载体中P
根据PRRSV VR-2332毒株核苷酸序列,设计针对M基因的特异引物,以PRRSVJL/07/SW毒株细胞培养物为模板,利用RT-PCR方法,成功扩增出M基因,将该基因与原核表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达。测序结果表明：M基因全长525bp,编码174个氨基酸,经同源性比较及进化树分析该毒株属于美洲型。表达产物经SDS-PAGE及Western blo
根据PRRSVVR-2332毒株核苷酸序列,设计针对GP5基因的特异引物,以PRRSVJL/07/SW毒株细胞培养物为模板,利用RT-PCR方法,成功的扩增出GP5基因,将该基因与真核表达载体pCI-neo连接,转染Marc-145细胞中,用间接免疫荧光试验、SDS-PAGE和western-blot鉴定目的蛋白的表达。结果：RT-PCR分别扩增出GP5基因大小与预期一致,与国际PRRSV美洲型V
从山东某大型猪场发病猪群中分离到PRRSV病毒(SX-1株)。用RT-PCR法对该分离株的NSP2和ORF5基因进行了扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析,结果表明,PRRSV SX-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与JXA1毒株相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.8％、94.9％、88.9％,氨基酸同源性分别为99.0％％、93