研究背景:线粒体是参与抗病毒天然免疫反应的重要细胞器。宿主细胞被病毒感染后,抗病毒信号传导复合物在线粒体外膜组装,涉及复杂的调控过程,其机制尚未完全阐明。目的:筛选参与抗病毒天然免疫反应的宿主因子:分析线粒体接头蛋白TRIM14介导抗病毒天然免疫反应的功能与机制。方法:通过基于转录组的siRNA筛选,鉴定调控宿主抗病毒天然免疫反应的关键因子。利用双荧光素酶报告系统检测干扰素相关通路的活化,通过激光共聚焦成像和细胞器分离实验研究TRIM14蛋白的亚细胞定位。通过免疫共沉淀实验检测与TRIM14相互作用的蛋白及作用位点。利用siRNA干扰技术等分析TRIM14介导线粒体抗病毒复合物装配的机制。结果:通过siRNA筛选实验发现TRIM14参与抗病毒天然免疫反应。过表达TRIM14能够激活细胞的Ⅰ型干扰素反应,而沉默TRIM14的表达具有相反的作用。TRIM14通过其N端序列定位于线粒体的外膜上,并通过其PRYSPRY结构域与线粒体抗病毒蛋白MAVS结合。TRIM14在病毒感染后发生K63泛素化,并通过该泛素化链介导NEMO的线粒体转位及其与MAVS的相互作用,沉默TRIM14的表达则破坏这一作用,从而影响抗病毒天然免疫反应的信号传导。结论:病毒感染宿主细胞后,位于宿主细胞线粒体外膜的TRIM14蛋白被泛素化,通过连接至K365位的K63泛素化链,TRIM14将NEMO募集至线粒体上,并促进NEMO与线粒体信号传导复合物的装配,这一过程能够介导IRF3/7或NF-κB的活化,从而诱导Ⅰ型干扰素的产生。上述结果表明TRIM14是线粒体天然免疫反应的重要组成部分。