【摘 要】
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目的:克隆重组肠激酶轻链(EKL)基因并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出具有生物活性的EKL蛋白.方法和结果:通过PCR获得二硫键异构酶(DsbA)基因和EKL基因的融合片断,此片断经回收和纯化后插入pET-3c表达质粒载体并获得高效表达DsbA-EKL的菌株,表达含EKL融合蛋白(含有6×His)经Ni柱鳌合和Q柱纯化后,显示出高效的EK酶切活性.结论:用DsbA基因与EKL融合可溶性表达的重组蛋
【机 构】
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重庆工学院生物工程学院,重庆,400050 重庆富进生物医药有限公司,重庆,400041
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目的:克隆重组肠激酶轻链(EKL)基因并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出具有生物活性的EKL蛋白.
方法和结果:通过PCR获得二硫键异构酶(DsbA)基因和EKL基因的融合片断,此片断经回收和纯化后插入pET-3c表达质粒载体并获得高效表达DsbA-EKL的菌株,表达含EKL融合蛋白(含有6×His)经Ni柱鳌合和Q柱纯化后,显示出高效的EK酶切活性.
结论:用DsbA基因与EKL融合可溶性表达的重组蛋白中具有EK的高效酶切活性,为进一步研究EK活性和在生物制品中奠定基础.
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