目的:随着全球单克隆抗体药物的高速发展,准确测定单抗类药物在生物基质里的浓度直接影响其药代毒代评价结果的准确性和可信性,对评价临床前研究药物体内暴露和药代毒代特征意义重大。免疫法和质谱法在单抗定量生物分析上各有特色,对贝伐珠免疫和质谱生物分析法深入全面比对,为合理选择方法意义重大。方法:利用skyline软件结合Xevo TQ-XS三重四级杆质谱选择特征肽段,建立质谱定量分析方法,并从样品前处理、液相和质谱方法多个方面优化方法。自建ELISA方法,利用VEGFA包被,贝伐珠单抗与包被结合来测定其浓度,并验证不同包被,显色等条件对免疫法的影响。进一步结合单因子分析比对免疫和质谱法对模拟真实猴血清样本中贝伐珠药物浓度测定结果的可比性。结果:通过优化前处理和Oasis MCX固相萃取方法结合Xevo TQ-XS的超高灵敏度,本研究建立的贝伐珠浓度测定质谱分析方法的线性范围为0.5～500μg/mL（猴血清中贝伐珠的浓度）,日间准确度在89%到106%之间,日间精密度在5%到9%之间。通过优化包被抗体和二抗等条件,本研究建立的ELISA分析方法的线性范围为0.02μg/mL～1μg/mL,日间准确度在86%到115%之间,日间精密度在8%到15%之间。单因子分析显示免疫法和质谱法方法测定模拟真实样品结果等效,但高浓度样本免疫法的测定结果变异明显高于质谱法。深入比较方法建立和验证过程结果发现;质谱法前处理不经过免疫富集,在灵敏度低的质谱仪上难于实现。由于单克隆抗体自身特点,残留是其质谱分析中比较显著的问题,可通过调整液相方法得到合理解决。免疫法作为单克隆抗体生物分析传统方法,方法建立和优化较为成熟,对生物试剂的要求较高,深入比较了国际知名厂家生产的6个不同批次的包被蛋白,发现6批中有2批无法重现已经建立和验证的方法,有1批与贝伐珠结合显著性低与其它批次。结论:本实验成功建立猴血清中贝伐珠分析的质谱方法和ELISA方法,并能对模拟真实猴血清样品进行合理定量。ELISA方法在灵敏度方面优势凸显,但质谱法定量范围较宽,减少ELISA方法大量稀释过程中引入的大量误差。质谱方法精密度和准确度及重现性优于ELISA方法,但质谱方法在方法开发过程复杂,对实验人员要求较高。