【摘 要】
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目的:研究 C1027高活性地引起肿瘤细胞死亡的机制。方法:PI、Hoechst33342染料观察染色质凝集;琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 梯带;流式细胞术检测 G1亚峰;试剂盒测定 caspase-3、c
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所; 北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所;
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目的:研究 C1027高活性地引起肿瘤细胞死亡的机制。方法:PI、Hoechst33342染料观察染色质凝集;琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 梯带;流式细胞术检测 G1亚峰;试剂盒测定 caspase-3、caspase-6活性;线粒体染料 MitosensorTM 检测凋亡细胞;PAGE 电泳检测蛋白的酶解。结果:1.用丝裂霉素 C、鬼臼乙叉甙处理人肝癌 BEL-7402细胞,12hr 后出现典型的凋亡细胞。但是,用1μmol/L C1027处理6hr 后,可观察到一种新型的死亡方式:棱膜一直保持完整,细胞仍贴壁, 不形成凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳检测到 DNA 梯带。该死亡方式也在人 KB、MCF-7肿瘤细胞中观察到。2.流式细胞术检测 G1亚峰, 仅在 C1027处理7402细胞24hr 后出现。3经丝裂霉素作用后的7402 凋亡细胞为绿色(MitosensorTM 染色),线粒体不着色;经 C1027处理6 hr 的细胞出现线粒体,染色质凝集,说明不是典型的凋亡细胞。4. C1027处理6小时的7402细胞后,caspase-3活性增高5倍,caspase- 6增高约4倍。5.10μmol/L C1027体外能把组蛋白 H1降解成小片段,该作用可被蛋白酶抑制剂 leupeptin 所抑制,但 C1027不能降解转铁蛋白和牛血清白蛋白 FV,表明 C1027具有特异于组蛋白 H1的蛋白酶活性。结论:C1027以双重机制作用于肿瘤细胞,一是在核小体处直接断裂 DNA,二是启动凋亡信号通路,因而表现出极高的活性。
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