霉菌毒素吸附剂对呕吐毒素吸附效果体内评价方法的初步建立

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[目的]呕吐毒素(DON)是对谷物和饲料污染严重的一种霉菌毒素,在饲料中添加霉菌毒素吸附剂是一种常见的降低DON危害的手段。然而市场上的吸附剂对DON的吸附效果参差不齐,也缺乏对DON吸附效果的快速简便的体内评价方法。本试验目的在于建立针对粪便和饲料中DON的高效液相色谱(HPLC)检测法,并使用该方法初步建立霉菌毒素吸附剂对DON吸附效果的体内评价方法,实现吸附剂对吸附DON方面准确、快速的评价。[方法]对乙腈、甲醇等10种提取液和提取次数、超声时间等提取条件进行摸索,确定针对粪便和饲料中DON的提取方法;对检测条件如检测波长、流动相等进行摸索,建立检测粪便和饲料中DON的HPLC方法。通过回收率、日内精密度与日间精密度等来验证该方法的适用性。制备发霉饲料,使饲料中DON浓度大于2μg/g。挑选15只保育猪,随机平均分为5组,选用3种不同的霉菌毒素吸附剂开展对保育猪体内DON吸附效果的评价试验,每日采集两次新鲜粪便。对所有粪便及饲料样品进行检测,遴选出对吸附DON有效的吸附剂。临床采集使用有效吸附剂的猪场粪便验证其吸附效果,初步建立霉菌毒素吸附剂对DON吸附效果的体内评价方法。[结果]检测结果确立了以乙腈作为粪便和饲料样品的提取液,在60~70℃水浴超声条件下重复提取2次,在220nm波长条件下以8%乙腈水溶液作为初始流动相梯度洗脱样品。吸附剂吸附试验中,只有吸附剂1表现出对DON明显的吸附效果,检测到含量非常高的DON粪便样品,其余品牌的吸附剂则没有表现出明显的吸附效果。采集6个猪场的粪便样品,其中3个猪场使用吸附剂1,16个样品中检测到4个高水平粪便样品(DON>2μg/g);另外3个使用其它品牌的吸附剂猪场的15个样品中没有检测到高水平粪便样品。根据以上结果确立了临床开展霉菌毒素吸附剂体内评价试验的初步方案。使用粪便作为检测载体评价吸附剂吸附DON的吸附效果,需至少满足以下三个条件:(1)饲料中DON的浓度大于2μg/g;(2)试验期大于5天;(3)粪便样品采集总份数大于10份。若粪便样品中DON>2μg/g的样品数超过总样品数的20%即可认为该吸附剂为有效吸附剂。[结论]本研究建立了能够快速、准确、大批量检测粪便和饲料中DON的高效液相色谱法;本研究初步建立了霉菌毒素吸附剂对呕吐毒素吸附效果的体内评价方法。
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