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[目的]研究类泛素化neddylation修饰在(DSB)修复中的功能和作用机制.DNA双链断裂是DNA损伤中最严重的一种形式,细胞针对这种损伤主要有两种修复方式：HR和NHEJ.HR一般认为在S期和G2期比较活跃.而NHEJ可以在整个细胞周期起作用,是DSB修复的主要通路.根据我们前期的研究发现,当DNA损伤以后,类泛素蛋白——NEDD8聚集到DNA损伤位点,探讨neddylation修饰在HR和NHEJ通路选择中的功能是本项研究的目的.[材料和方法]预先用3μM neddylation抑制剂MLN4924或者DMSO对照预处理高密度生长的HeLa细胞(＞90培养皿密度)1小时,然后用4Gy电离辐射(IR)处理细胞,分别在15min、30min、1小时、2小时和4小时不同时间点固定细胞,然后用免疫荧光染色检测γH2AX foci情况,比较各个时间点的γH2AX foci阳性细胞百分比来评价neddylation对NHEJ修复的影响；预先用3μM neddylation抑制剂MLN4924或者DMSO对照预处理细胞1小时,然后用30 μg/ml依托泊苷或者4Gy电离辐射(IR)处理细胞,分别收取未处理、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时的细胞沉淀,然后将细胞用NETN300裂解液裂解,用western blot检测DNA-PKcs蛋白、DNA-PKcs第2056位丝氨酸磷酸化、Ku86蛋白、Ku70蛋白、NEDD8修饰蛋白来评估neddylation对NHEJ关键蛋白的影响.[结果]通过对γH2AX foci的统计分析,我们发现抑制内源性neddylation修饰后,γH2AX foci在实验组有所增加；western blot结果表明,在加入了NEDD8的抑制剂MLN4924以后DNA-PKcs蛋白、Ku86蛋白和Ku70蛋白总量没有变化.MLN4924明显地抑制了细胞内的neddylation修饰,同时在电离辐射处理组,DNA-PKcs 2056磷酸化与对照组相比有一定程度的减少.在依托泊苷处理组,DNA-PKcs第2056位丝氨酸磷酸化的降低则更明显.但是这种现象背后的分子机理仍有待研究.以DNA-PKcs 2056位为代表的DNA-PKcs自磷酸化基团簇是调节NHEJ通路的重要修饰.本研究初步提示neddylation修饰参与了NHEJ修复,为进一步理解DNA双链断裂损伤修复的分子机制提供了新的方向.