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环境污染导致有机氯类农药等有毒物质在自然水体中大量积累,严重威胁鱼类和其它水生生物的生存,并可通过饮用水和食物链等渠道危害人类健康.ABCC4 属于ABC 转运蛋白超家族成员,作为多毒物耐受的主要因子,在毒物排泄、组织防御和信号传导等方面有着重要的生理学作用.研究表明斑马鱼abcc4 基因是哺乳动物ABCC4 直系同源基因,也可能具有识别和转运多种毒物的功能.本研究克隆了斑马鱼abcc4 基因的编码序列,建立了稳定表达斑马鱼Abcc4 及其显性失活体Abcc4-G1188D 的LLC-PK1 细胞系,并研制出有效整合的转abcc4 基因斑马鱼品系,为探讨过表达斑马鱼abcc4 基因在毒物解毒和排泄中的分子功能及其作用机理提供细胞和转基因动物模型.取得的研究结果如下：DDT 和lindane 是一类具有毒性的有机氯类农药,对生态环境和人类健康构成了严重威胁.本研究证实了斑马鱼Abcc4 具有介导LLC-PK1 细胞和斑马鱼胚胎对DDT 和lindane 外排的生理功能.研究结果显示DDT 或lindane 能显著诱导斑马鱼abcc4 mRNA 的上调表达.过表达斑马鱼abcc4 基因能大幅度增强LLC-PK1 细胞和斑马鱼胚胎对DDT 和lindane 的耐受能力和外排能力.其显性失活体Abcc4-G1188D 可竞争性抑制内源性Abcc4 的功能,将其过表达后提高了DDT 和lindane 对LLC-PK1 细胞和斑马鱼胚胎的毒性.此外,DDT 或lindane处理也能显著诱导谷胱甘肽(GSH)和ATPase 活性的升高.以上结果表明斑马鱼Abcc4 可能是介导有机氯类农药DDT 和lindane 解毒和排泄的重要因子.本研究还采用转基因技术并结合SB(Sleeping Beauty)转座子系统研制转abcc4 基因斑马鱼品系.首先构建了"全鱼"序列的转基因载体,即启动子和PolyA 序列均来自鲤鱼β-肌动蛋白基因,在abcc4 编码序列的终止子引入了Flag 标签序列用于表达分析.P0 代转abcc4基因斑马鱼阳性率为22.1％,并获得了3 条可通过性腺传递的P0 代阳性个体.将这3 条P0代亲本分别与野生型鱼配对繁殖,F1 代阳性鱼筛选的比率分别是43.75％、47.22％和52.08％.qPCR 和Western Blotting 结果表明有2 尾F1 代阳性鱼能够有效表达.通过F2 代有效整合的阳性鱼自交,获得了转abcc4 基因纯合鱼品系,为后续深入开展斑马鱼Abcc4 转运蛋白抗毒物积累排泄的功能及其作用机制提供了模型.