【摘 要】
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本实验结肠癌是人类高发恶性肿瘤之一,而益生菌已被证实具有很多生物活性,可以通过多种途径降低或抑制结肠癌的发生和生长.本文采用本实验室自行分离的免疫活性乳杆菌L.p
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本实验结肠癌是人类高发恶性肿瘤之一,而益生菌已被证实具有很多生物活性,可以通过多种途径降低或抑制结肠癌的发生和生长.本文采用本实验室自行分离的免疫活性乳杆菌L.paracasei supsp.M5L,通过与结肠癌细胞HT-29共培养来研究其对肿瘤细胞的抑制作用及机制.通过MTT法测得免疫活性乳杆菌对结肠癌细胞有明显的增殖抑制作用,并且此抑制作用与感染系数和作用时间呈正相关关系.当以最大感染系数100∶1的活菌体和灭活菌体作用HT-29细胞72h后,HT29的生长抑制率分别达到28.9％和54.6％.采用HE染色法对活菌体和灭活菌体作用后的癌细胞进行形态学观察,发现随着时间推移,癌细胞的形状会变的不规则,部分细胞体积变大,细胞容易粘附成团,对活菌体和灭活菌体作用72h的HT-29细胞进行电镜观察,发现有较多细胞出现凋亡现象,细胞产生早期凋亡小体,线粒体变性,功能衰退,细胞表面绒毛突起消失,内质网出现肿胀现象.活菌体和灭活菌体作用HT-29细胞72h后,采用流式细胞仪检测钙网蛋白荧光强度发现,作用后细胞膜表面钙网蛋白量显著增加,说明钙网蛋白移位,L.paracasei supsp.M5L能诱导HT-29细胞产生免疫原性死亡.采用流式细胞术检测了免疫活性乳杆菌作用后癌细胞周期分布与作用时间的关系,发现免疫活性乳杆菌灭活菌体能有效改变癌细胞的周期分布,将细胞周期阻滞在S期.可以得出结论,L.paracasei supsp.M5L一方面能诱导HT-29细胞凋亡,发生免疫原性死亡,另一方面又能阻滞HT-29细胞周期变化来实现增殖抑制作用.
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