慢性阻塞性肺疾病稳定期患者外周血CD8+T细胞自噬水平与数量的相关性研究

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目的:通过检测COPD稳定期患者外周血中CD8+T细胞亚群分布,其自噬基因、自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达水平,探讨CD8+T细胞自噬水平与其数量的相关性,有助于明确COPD稳定期患者CD8+T细胞长期升高的原因,进一步明确COPD的发病机制。方法:将研究对象分为COPD稳定期组(COPD)、吸烟肺功能正常组(SN)、不吸烟肺功能正常组(NSN)各30例,用流式细胞术检测外周血中CD8+T细胞总数,包括CD8+效应性T细胞和记忆性T细胞的比例及其凋亡情况。用流式细胞术分选出CD8+T细胞,运用实时定量PCR检测LC3、P62基因的表达水平;运用蛋白免疫印迹技术检测LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达水平。结果:1、流式细胞术检测CD8+T细胞数量及凋亡结果显示:(1)COPD组CD8+T细胞数(%)(32.33±4.23%)明显高于其他两组(p<0.05);COPD组CD8+效应性T细胞数(25.63±8.57)、记忆性T细胞数(22.10±6.706)均高于其他两组(p<0.05)。SN组CD8+T细胞数、CD8+效应性T细胞数、记忆性T细胞数均高于NSN组(p<0.05)。(2)COPD组CD8+T细胞凋亡率(23.51±6.11%)低于其他两组(P<0.05),SN组低于NSN组(p<0.05)。2、三组LC3基因表达水平无显著性差异(p>0.05);P62基因在COPD组表达高于其他两组(p<0.05),SN组高于NSN(p<0.05)。3、自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ在COPD组表达高于其他两组(p<0.05),SN组高于NSN组(p<0.05);P62蛋白在COPD组表达高于其他两组(p<0.05),SN组高于NSN组(p<0.05)。4、相关性分析:(1)、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平分别与CD8+T细胞总数(r=0.572,p<0.05)、CD8+效应性T细胞(r=0.672,p<0.05)、CD8+记忆性T细胞(r=0.739,p<0.05)均存在正相关关系;LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平与CD8+T细胞凋亡率无明显相关性。(2)、P62的表达水平与CD8+T细胞总数、CD8+效应性T细胞、CD8+记忆性T细胞均存在正相关关系,p<0.05;P62的表达水平与CD8+T细胞凋亡率无明显相关性。5、回归分析:(1)CD8+T细胞总数、CD8+效应性T细胞数、CD8+记忆性T细胞数与LC3Ⅱ/Ⅰ/GAPDH(?)、P62/GAPDH(?)均存在线性关联,具有统计学意义(P<0.001)。结论1、COPD稳定期患者外周血CD8+T细胞数量有显著增加,其中包括CD8+效应性T细胞和记忆性T细胞的比例增加,而CD8+T细胞凋亡率降低;2、COPD稳定期患者外周血CD8+T细胞的自噬水平显著升高。3、COPD稳定期患者外周血CD8+T细胞的自噬蛋白表达水平与细胞数量之间存在正相关关系。提示细胞自噬有可能通过促进CD8+T细胞数量的增多,从而参与COPD稳定期的慢性气道炎症。
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