糖链抗原CA50时间分辨荧光免疫分析方法的建立

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<正>CA50是目前临床较为肯定的可反映多种恶性肿瘤预后情况的体外诊断指标。CA50的检测已有RIA、ELISA和IRMA等方法,共同的问题是受方法学示踪化合物或元素应用的限制,试剂效期或稳定性欠佳。我们以抗CA50单克隆抗体包被微孔板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记CA50 单克隆抗体,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。建立了灵敏度高,稳定性好,量程宽,无放射性污染的糖链抗原CA50时间分辨荧光免疫分析法(Carbohydrate antigen 50Time-resolved fluoroimmunoassay,CA50-TRFIA)。在包被有抗体的96孔微孔板上,每孔依次加入20μl CA50参考标准或待测血清,200μl反应缓冲液,室温(25℃)振荡孵育2小时,用洗涤液洗涤5次,加入1:100 稀释的Eu3+抗CA50单克隆抗体200μl,室温振荡孵育1小时后,用洗涤液洗涤5次。加增强液200μl,室温振荡反应5分钟,荧
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