本研究利用新孢子虫MIC6重组蛋白对BALB/c小鼠进行免疫,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经克隆筛选获得两株杂交瘤细胞株,分别命名为1A1和1H11.利用免疫荧光技术,通过共聚焦激光扫描荧光显微镜对新孢子虫MIC6蛋白抗原进行了定位,发现该蛋白定位于新孢子虫速殖子前端.利用抗新孢子虫MIC6单克隆抗体,建立了检测梅花鹿感染犬新孢子虫双抗夹心Dot-ELISA的方法,经过一系列试验测定确定最佳反应条件为：HRP标记抗体稀释比例为1∶100,包被抗体最适浓度为0.3μg/片,被检血清最合适的稀释比例为1∶8.特异性、敏感性、重复性、灵敏度试验结果表明建立的方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和灵敏度.利用该方法和双抗夹心ELISA方法对长春地区某鹿场鹿79份血清样品同时进行检测,结果表明阳性率均为15.2％ (12/79).从而为梅花鹿感染犬新孢子虫的检测提供了新方法.