目的通过研究DNA甲基化在双酚A(BPA)影响巨噬细胞存活中的作用,为进一步研究外源化学物对巨噬细胞的免疫毒性提供科学依据。方法以小鼠白血病巨噬细胞(RAW264.7)为靶细胞,以不同浓度脂多糖(LPS)为激活剂,以1μmol·L~(-1)、10μmol·L~(-1)、100μmol·L~(-1)、200μmol·L~(-1)、500μmol·L~(-1)BPA染毒细胞,采用10mmol·L~(-1)DNA甲基化抑制剂阿扎糖苷进行干预,分别作用细胞4h、12h和30h。采用MeDIPchip甲基化芯片检测BPA对细胞DNA甲基化的影响;采用实时定量PCR方法检测细胞三种DNA甲基转移酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b的基因表达;采用CCK8法检测细胞活力。结果DNA甲基化芯片结果显示,与LPS比较BPA显著上调了616个位点的甲基化,没有发生甲基化或甲基化下调的位点有308个位点;GO分析提示BPA明显调控巨噬细胞DNA甲基化的基因参与了intracellularsignaltransduction、regulationofGTPaseactivity、S-adenosylhomocysteinemetabolicprocess等过程,其中25个基因的高甲基化参与了细胞内的信号传导,如MYO9B,ARFGEF2,PLCL2等。此外,BPA影响了S-腺苷高半胱氨酸代谢过程,使DNMT1、DNMT3A和PCMT1等四个基因启动子区域的CpG岛高甲基化,从而抑制这些基因的表达及功能。KEGG通路分析显示BPA染毒使细胞产生的DNA甲基化差异基因影响了Regulationofactincytoskeleton、Axonguidance、AMPK、signalingpathway、AMPK、PI3K-AKT等17个信号通路。RTPCR结果显示,BPA作用12h抑制了DNMT3A基因表达,而对DNMT3B和DNMT1无明显影响,与甲基化芯片的结果一致。BPA作用30h,与LPS比较200μmol/LBPA可以明显抑制细胞存活;而与200μmol/LBPA比较,10mmol/LDNA甲基化抑制剂阿扎糖苷使细胞存活率明显升高。结论BPA影响巨噬细胞DNA甲基化模式,从而影响其基因表达,DNA甲基化转移酶可能参与BPA影响巨噬细胞存活。