【摘 要】
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本研究通过基因工程手段从影响聚谷氨酸合成的五个方面对聚谷氨酸合成代谢网络进行改造,包括:副产物合成,聚谷氨酸降解,自诱导因子合成,谷氨酸前体合成以及聚谷氨酸合成.通过
【机 构】
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南开大学分子微生物与技术教育部重点实验室天津300071南开大学药物化学生物学国家重点实验室300071南开大学分子微生物与技术教育部重点实验室天津300071;南开大学药物化学生物学国家重点实验室3
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本研究通过基因工程手段从影响聚谷氨酸合成的五个方面对聚谷氨酸合成代谢网络进行改造,包括:副产物合成,聚谷氨酸降解,自诱导因子合成,谷氨酸前体合成以及聚谷氨酸合成.通过无痕敲除方法我们首先在解淀粉芽孢杆菌NK-1的基础上对细菌多糖基因sac,epsA-O,lps和glyc进行敲除.得到的NK-E5(Δsac,ΔepsA-0,Δlps)菌株产量较野生型没有提高,但是产物纯度明显提高.随后又在NK-E5菌株的基础上对小分子副产物基因pta和1dh进行单基因敲除和双基因敲除.最终pta基因单敲除NK-E7菌株产量较野生型有微量的提高从3.8 g/L提高到4.15 g/L.在NK-E7菌株的基础上进一步敲除了聚谷氨酸降解相关基因cw10以及pgdS得到NK-E10菌株,聚谷氨酸产量从4.15 g/L提高到9.18 g/L.
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