【摘 要】
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目的：探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白70(HSP70)诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法：采用人成骨肉瘤细胞MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆到含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中,构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的：探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白70(HSP70)诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法：采用人成骨肉瘤细胞MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆到含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中,构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70.重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆.使用荧光显微镜观察细胞形态及转染的效果；荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot实验检测稳转细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化；用MTT、流式细胞术检测细胞增殖凋亡能力的变化,Western blot方法检测凋亡及周期相关蛋白表达量的变化；MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对靶肿瘤细胞MG63的杀伤作用.
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