【摘 要】
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目的:克隆刚地弓形虫强毒RH株的免疫作图蛋白1(IMP1),并在大肠埃希菌内进行重组表达、纯化和鉴定.
方法:以刚地弓形虫RH株的cDNA为模板,PCR(聚合酶链反应)扩增IMP1基因的
【机 构】
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山东省医学科学院,山东省寄生虫病防治研究所,济宁272033
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目的:克隆刚地弓形虫强毒RH株的免疫作图蛋白1(IMP1),并在大肠埃希菌内进行重组表达、纯化和鉴定.
方法:以刚地弓形虫RH株的cDNA为模板,PCR(聚合酶链反应)扩增IMP1基因的完整开放阅读框(ORF序列)并进行TA克隆,对突变位点采用重叠PCR法修复,构建重组表达载体pET28b-IMP1并转化大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达IMP1重组蛋白,并通过梯度试验筛选最优表达条件、测定蛋白可溶性,通过镍柱亲和层析纯化IMP1重组蛋白,Westem blot(蛋白质印迹法)验证.
结果:成功克隆并修正了免疫作图蛋白IMP1的全长序列,成功构建了原核表达重组质粒pET28b-IMP1,重组蛋白的最佳表达条件为20℃下0.3mMIPTG诱导6h;成功纯化并鉴定了可溶性IMP1全蛋白.
结论:新型强毒弓形虫RH株的免疫作图蛋白IMP1可在大肠埃希菌中高效可溶性表达.
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