【摘 要】
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为了探讨家蚕bmo-miR-2758对丝腺蛋白特异性转录因子FMBP-1的调控作用,首先利用茎环引物反转录方法对家蚕幼虫4龄、5龄时期的中部丝腺(MSG)和后部丝腺(PSG)的bmo-miR-2758进
【机 构】
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中国农业科学院蚕业研究所,江苏镇江,212018江苏科技大学农业部蚕桑遗传改良重点实验室,江苏镇江,212003江苏科技大学农业部蚕桑遗传改良重点实验室,江苏镇江,212003;中国农业科学院蚕业研究
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为了探讨家蚕bmo-miR-2758对丝腺蛋白特异性转录因子FMBP-1的调控作用,首先利用茎环引物反转录方法对家蚕幼虫4龄、5龄时期的中部丝腺(MSG)和后部丝腺(PSG)的bmo-miR-2758进行半定量表达分析,同时,利用半定量PCR对FMBP-1基因的表达水平进行分析;然后利用家蚕细胞瞬时表达系统,分别构建luc-FMBP1-3′-UTR表达载体和miRNAs的重组表达载体,将上述两种瞬时表达载体共转染家蚕BmN细胞,检测荧光素酶的活性,在细胞水平验证家蚕bmo-miR-2758的功能.结果显示,家蚕bmo-miR-2758在幼虫4龄、5龄时期的MSG和PSG均有表达,且PSG的表达量相对较高,这与FMBP-1基因的表达模式呈现一致的趋势.当两种瞬时表达载体共转染BmN细胞之后,实验组相对于阳性对照组荧光素酶活性降低,且两组之间差异显著(P<0.05),即转染了miRNAs表达载体的荧光蛋白表达量降低.由此可见,bmo-miR-2758的表达对FMBP-1具有一定的调控作用.
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