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目的:观察中药健脾散结解毒法含药血清对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子 CyclinD、E、CDK2(Cyclin dependant kinase2,CDK2)CDK4、CDK6和P16、P27mRNA及其蛋白表达的作用。
方法:分别与高、中、低不同剂量的中药健脾散结解毒法制剂对Wistar 雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞,采用免疫组织化学SABC法检测各组胃癌细胞中CyclinD、E、CDK2、CDK4、CDK6和P16、P27 蛋白的表达,RT-PCR 法检测各组胃癌细胞中CyclinD、E、CDK2、4、6和P16、P27mRNA的表达。
结果:免疫组化法结果显示,中药健脾散结解毒法高、中、低剂量组CyclinE和CDK2,CyclinD2和CDK4、CDK6 灰度值均有明显升高,与空白对照组比较(P<0.05-0.01)而P27、P16 灰度值则显著降低(P<0.05-0.01),RT-PCR。中药健脾散结解毒法高、中、低剂量组均能明显降低CyclinE、CDK2 、CyclinD2和CDK4、CDK6 OPTDI值(P<0.05-0.01),同时升高P27、P16 OPTDI 值(P<0.05-0.01)。
结论:中药健脾散结解毒法可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2 mRNA和蛋白的表达,抑制CDK4、CDK6 mRNA和蛋白的表达,增强胃癌细胞周期抑制因子P16蛋白的表达。同时,中药健脾散结解毒法含药血清能抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinE及CDK2 mRNA和蛋白的表达,增强胃癌细胞周期抑制因子P27 mRNA和蛋白的表达。这可能是中药健脾散结解毒法抑制胃癌细胞生长的作用机制。