【摘 要】
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[目的]蛋白磷酸酶2A (Protein phosphatase 2A,PP2A)是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,由结构亚基、调节亚基和催化亚基(C亚基)组成,其中C亚基甲基化对PP2A全酶的功能
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]蛋白磷酸酶2A (Protein phosphatase 2A,PP2A)是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,由结构亚基、调节亚基和催化亚基(C亚基)组成,其中C亚基甲基化对PP2A全酶的功能发挥具有重要作用,其去甲基化受羧基甲基酯酶(PME)调控.本研究探讨过氧化氢(H2O2)对蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2A-C)甲基化及羧基甲基酯酶(PME)核质分布的影响.[材料和方法]以原代培养的皮肤成纤维细胞HPF及小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3 T3细胞)为研究对象,激光共聚焦显微镜扫描检测H2O2处理及N-乙酰半胱氨酸和PME抑制剂等对细胞总PP2A-C、去甲基化PP2A-C核质分布的影响;构建与绿色荧光蛋白融合的PME高表达293细胞株(PME-GFP293),激光共聚焦显微镜扫描动态观察H2O2处理对细胞PME核质分布变化.[结果]结果显示H2O2诱导细胞内去甲基化PP2Ac表达增加,且核内/胞浆比例分布较空白对照组明显降低;使用NAC拮抗H2O2后PME-1和去甲基化PP2Ac的核内/胞浆比例较单纯H2O2刺激时有明显提高;使用PME抑制剂拮抗H2O2后PME-1和去甲基化PP2Ac的核内/胞浆比例与单纯H2O2刺激时相似;总PP2Ac与LCMT的变化在各组间均未有统计学差异.HPF及NIH 3T3细胞结果相似.PME-GFP293细胞株与空质粒转染细胞比较,蛋白免疫印迹显示PME表达明显升高.激光共聚焦扫描结果显示,绿色荧光分布于胞核与胞浆,H2O2刺激后,荧光强度核质比逐渐下降.[结论]氧化应激诱导细胞去甲基PP2A-C核质分布异常,可能与氧化应激下PME的核质分布有关.
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