论文部分内容阅读
研究目的：研究CypA稳定沉默后对BGC-823胃癌细胞体内外细胞学行为的影响及分子机制研究方法：采用RNAi的方法稳定沉默BGC-823胃癌细胞中CypA的表达,MTT法进行细胞增殖检测,克隆形成实验进行细胞克隆形成能力检测,流式细胞术进行细胞周期和凋亡检测,采用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验进行细胞迁移和侵袭能力的检测,之后根据细胞学实验的结果又采用western-blot的方法检测了MAPK信号传导通路分子ERK1/2和p-ERK1/2、自噬相关分子P62和LC3B、转移相关分子MMP9、p-Stat3等蛋白的表达变化.随后采用裸鼠体内荷瘤的方法检测了CypA稳定沉默后对BGC-823胃癌细胞体内生长的影响.研究结果：成功构建了CypA的稳定RNA干扰载体,转染BGC-823胃癌细胞,并成功筛选出了高效沉默CypA的BGC-823胃癌细胞克隆shCypA BGC-823.CypA稳定沉默后,BGC-823胃癌细胞的增殖能力和克隆形成能力明显下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,但是并未见细胞凋亡的显著增加；BGC-823细胞的迁移和侵袭能力显著降低；p-ERK1/2蛋白的绝对量减少,p-ERK1/2与ERK1/2的比值减少；MMP9蛋白的表达量减少；自噬相关蛋白P62的表达量减少,LC3B Ⅱ型蛋白的表达量增多,LC3B Ⅰ型与LC3B Ⅰ型的比值增加；β-catenin蛋白和p-Stat3蛋白略有减少,NF-κ B蛋白没有显著变化；裸鼠荷瘤的肿瘤生长明显减慢,Ki67标记的增殖癌细胞的比率显著下调.研究结论：稳定沉默CypA可能通过抑制ERK1/2信号转导通路活性,抑制MMP9蛋白的分泌及诱导癌细胞自噬,进而抑制BGC-823胃癌细胞的体外增殖和侵袭能力,并使细胞周期阻滞于G0/G1期；另外ypA沉默还可能通过下调β-catenin抑制Jak2和Wnt信号通路的活性.CypA稳定沉默后能抑制BGC-823胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制BGC-823胃癌细胞的体内增殖活性,有望成为胃癌治疗的一个新的分子靶点.