<正>目的人自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶(histidyl- tRNA synthetase,HRS),亦称Jo-1抗原,与多发性肌炎/皮肌炎(PM／DM)的发病机理相关。本室已在大肠杆菌中成功表达 Jo-1融合抗原,但抗原的后续纯化、切割处理过程十分不便。本文尝试利用近年来研究发展最快的甲基营养型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)对Jo-1基因进行了高效分泌表达研究。方法 PCR扩增Jo-1基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-Jo-1。用电穿孔法转化酵母菌 SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫酶斑点法(immunodot)鉴定。结果 PCR产物约为1．500 bp,与预期1 526 bp接近,pPIC9k-Jo-1重组阳性克隆测序结果与 GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确。表达产物Jo-1的分子量约50 000,高拷贝毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60％以上, 产物浓度为800-900mg／L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然Jo-1分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论本研究用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功高效表达重组自身抗原Jo-1,既可以解决传统提取法中抗原不纯的关键问题,又可低成本大量制备均一的自身抗原。除Jo-1 外,我们准备用同样的方法克隆表达一系列其它人自身抗原。可以预期,采用多种高纯度的基因重组自身抗原作成的蛋白芯片或胶体金试剂盒,将会比IBT法更准确、快速、敏感和特异,以便能较好的解决困扰临床医生的自身免疫病诊断难、易误诊和漏诊的问题。