【摘 要】
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目的:探索17-β雌二醇(E2)对大鼠纤维环细胞凋亡的作用.方法:原代培养大鼠纤维环细胞,贴壁细胞融合为单层时,用含EDTA的0.2％的胰酶消化传代.细胞生长至第3代时,用不含胎牛血清和酚红的DMEM培养液培养,按以下分组实验,每组均为6个样本.A组:平行对照组,未加入E2干预,仅在无血清无酚红培养液中培养;B组:E2干预组,加入E2干预;C组:E2+ICI182780(ICI)干预组,加入E2和
【出 处】
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中华医学会第十四届骨科学术会议暨第七届COA国际学术大会
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目的:探索17-β雌二醇(E2)对大鼠纤维环细胞凋亡的作用.
方法:原代培养大鼠纤维环细胞,贴壁细胞融合为单层时,用含EDTA的0.2％的胰酶消化传代.细胞生长至第3代时,用不含胎牛血清和酚红的DMEM培养液培养,按以下分组实验,每组均为6个样本.A组:平行对照组,未加入E2干预,仅在无血清无酚红培养液中培养;B组:E2干预组,加入E2干预;C组:E2+ICI182780(ICI)干预组,加入E2和雌激素受体(ER)抑制剂ICI182780.细胞培养48小时后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过ELISA试剂盒进行整联蛋白α5β1定量检测,应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测相应mRNA表达情况,通过纤连蛋白粘附实验检测细胞与胞外基质的粘附作用.
结果:(1)细胞凋亡检测实验,各组细胞凋亡率的差异有统计学意义(F=24.196,P＜0.05).B组凋亡率低于A组(P＜0.05),B组凋亡率亦低于C组(P＜0.05),C组低于A组,且差异有统计学意义(P＜0.05).(2)ELISA法检测各组整联蛋白α5β1,B组OD值高于其余两组,差异有统计学意义(F=7.155,P＜0.05),A组高于C组,但差异无统计学意义.(3)qPCR结果表明,整联蛋白Ct(α5β1)/Ct(GAPDH),各组mRNA表达量差异均有统计学意义(F=12.710,P＜0.05).B组mRNA表达量高于A组(P＜0.05),C组低于B组(P＜0.05).(4)细胞对纤连蛋白的粘附实验显示,各组OD值(吸光度)比较,差异有统计学意义(F=10.680,P＜0.05),B组高于A组(P＜0.05),C组低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).
结论:17-β雌二醇抗大鼠纤维环细胞凋亡,可能是通过细胞膜整联蛋白α5β1与胞外基质纤连蛋白机制发挥作用,具有改善或者修复纤维环的应用价值.
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