目的 应用基因工程技术构建出具有靶向治疗功能的新型TGF-β3融合蛋白LAP-MMP-mTGF-β3,并检验其诱导脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)成软骨分化的可行性与靶向特异性。方法 首先,经基因重组定向克隆将人工合成的编码基质金属蛋白酶(MMP)切位点氨基酸的正、反义DNA序列插入真核表达载体pIRES-EGFP得到重组体plRES-EGFP-MMP,再将用RT-PCR技术获取的TGF-β3的潜在相关肽(LAP)片段插入到pIRES-EGFP-MMP中MMP的上游,获取的TGF-β3的活性片段mTGF-β3插入到MMP的下游,构成重组质粒pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3；然后将质粒pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3转染脂肪干细胞,分转染组与未转染组进行培养,转染组又分为实验组(含MMP酶)和对照组(不含MMP酶),分别于分组培养的第7、14、21天进行光镜观察细胞的形态变化,阿利新蓝染 色和二型胶原(ColⅡ)免疫组化染色检测蛋白多糖和Col Ⅱ的表达。结果 重组质粒pIRE S-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3经酶切和测序鉴定与预期相符；转染ADSCs后成功表达LAP-MMP-mTGF-β3融合蛋白,分组培养结果说明,在MMP酶存在时被激活生成活性蛋白mTGF-β3,从而显著促进脂肪干细胞向软骨细胞的分化和软骨基质的表达。结论 成功构建的新型融合蛋白LAP-MMP-mTGF-p3可靶向性诱导脂肪干细胞成软骨分化,具有靶向性修复软骨缺损的应用前景。