【摘 要】
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目的：通过构建A20突变体真核载体,研究其对前列腺癌细胞PC-3M细胞炎症反应的影响.方法：构建A20突变体pEGFP-C1表达载体,提取质粒,限制性内切酶酶切鉴定并测序.质粒DNA转染COS7细胞,用LPS诱导PC-3M细胞产生炎症反应,利用Western blot法检测PC-3M细胞A20的表达,利用ELISA检测NFκB、TNF-α、IL-1 β等的水平.结果：限制性内切酶酶切鉴定与DNA测
【机 构】
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成都军区总医院临床实验医学研究与保障中心 成都 610083
【出 处】
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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
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目的：通过构建A20突变体真核载体,研究其对前列腺癌细胞PC-3M细胞炎症反应的影响.方法：构建A20突变体pEGFP-C1表达载体,提取质粒,限制性内切酶酶切鉴定并测序.质粒DNA转染COS7细胞,用LPS诱导PC-3M细胞产生炎症反应,利用Western blot法检测PC-3M细胞A20的表达,利用ELISA检测NFκB、TNF-α、IL-1 β等的水平.结果：限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实合成A20突变体真核载体寡核苷酸链插入正确.Westernblot检测结果表明转染后PC-3M细胞A20蛋白表达显著增加.ELISA法检测结果表明,LPS刺激后,空白组及空载体组NF-κB、 TNF-α、1L-Iβ表达均明显上调,而A20突变体组没有明显上调,与单纯LPS组比较,有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).结论：成功构建人A20突变体真核表达载体,并发挥其抗炎作用.
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