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目的：研究脊髓损伤后，Olomoucine与GDA对神经功能恢复的影响，探索其联合治疗的可行性，分析并阐述其作用机理，最终目的足致力于临床脊髓损伤后神经功能的可塑性研究。
方法：⑴取健康清洁级SDE13.5天孕鼠胚胎脊髓，分离并培养GRP细胞，以BMP4诱导，获得GDA。⑵以72只清洁级SD雌性大鼠(200±20g)为受试对象，运用NYU打击器采用Allens法制成大鼠脊髓损伤模型。按处理因素不同将其随机分为4组：空白对照、Olomoucine、GDA以及联合治疗组，每组大鼠18只，分别于造模给药处理后第4天、8天、15天、22天及第29天时观察记录大鼠后肢活动及行走情况，进行BBB功能评分测定，比较分析不同处理方式对大鼠后肢运动功能恢复的影响。⑶各组按免疫组化时间点的不同，随机分为3个亚组：分别于造模后第4天、8犬及第29天时安乐处死。每亚组大鼠6只，其中3只于处死前2周时行皮层BDA示踪，以标记运动轴突，3只于处死前7大时行脊髓BDA示踪，标记感觉轴突.大鼠处死后，心脏灌注，取脊髓，进行双重荧光免疫细胞化学法检测，经荧光图象分析系统观察和分析脊髓内空洞面积与脊髓总面积的比值、再生轴突数量、宿主星形胶质细胞突起夹角以及GFAP的表达程度。
结果：①Olomoucine和GDA均可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。其中，Olomoucin。组大鼠于全观察时间点，BBB评分均好于对照组(P<0.05)，但术后4天以后各时间段内增幅与对照组相比无差异(P>0.05)；而GDA组BBB虽于术后第4天时与对照组相比无差异，但于此后的4.22天时间段内却能明显提高BBB的增幅(P<0.05)，BBB于术后第8天时好于对照组(P<0.05)，15天以后与对照组差异显著(P<0.001)，22天以后则同时显著好于Olomoucine组(P<0.01)；GDA与Olomoucine联合使用后，大鼠BBB于术后第4天时即好于对照组(P<0.05)，与Olomoucine组的显著差别亦较早体现(术后第15天起，P<0.01)，但远期效果与GDA单独应用组之间并无明显差异(术后第29天，P>0.05)，各时间段内的增幅与单独应用GDA组相比，亦未有明显提高(P>0.05)。②Olomoucine和GDA都可减小大鼠脊髓损伤后脊髓内空洞的面积(P<0.001)。不同之处在于，Olomoucine组脊髓内空洞面积随时间推移而逐渐增大，而GDA组脊髓内空洞面积则随时间推移而减小，二者联合使用后，其空洞面积特征早期与Olomoucine相似(术后第4、8天，P>0.05)，最终面积也小于GDA单独组(术后第29天)，但二者间差异并无统计学意义(P>0.05)。③GDA可明显抑制脊髓内胶质瘢痕的形成，减少GFAP的表达(P<0.01)，而Olomoucine无此作用(P>0.05)，GDA与Olomoucine联合使用后，GFAP含量与GDA单独应用组相比无统计学差异(P>0.05)。④脊髓损伤后，脊髓内星形胶质细胞增生，发生胶质化反应，其突起如网格状杂乱无章，平均夹角达67.25；Olomoucine组夹角与对照组相比无明显差异(P>0.05)；而GDA组宿主星形胶质细胞突起线性良好，平均夹角约35°，显著低于Olmoucine和对照组(P<0.001)；GDA与Olomoucine联合使用后，对胶质化的抑制作用无明显改变(P>0.05)。⑤Olomoucine于损伤各水平感觉轴突数量均明显高于空白对照组(P<0.01)，提示其能够促进轴突的生长；GDA使感觉轴突在损伤各水平的数量显著提高，44％到达损伤中心，并最终有7.1％的感觉轴突能到达损伤头侧5mm处，结果均明显好于Olomoucine(P<0.01)；GDA与Olomoucinc联合使用后，于各损伤水平的感觉轴突数量较GDA单独应用组相比并无明显改变(P>0.05)，于损伤头侧5mm处甚至低于单独应用组(P>0.05)，提示二者联用时，促进感觉轴突生长的协同作用不明显。⑥Olomoucine能够增加进入损伤头侧边缘以及损伤中心的运动轴突数量(P<0.01)，但其无力促进轴突穿过损伤区域，并穿出尾侧边缘(P>0.05)；GDA使运动轴突在损伤各水平的数量都显著提高(P<0.01)，42％到达损伤中心，并最终有4.6％的运动轴突能到达损伤尾侧5mm处，明显优于Olomoucine(P<0.01)；GDA与Olomoucine联合使用后，于各损伤水平的运动轴突数量较GDA单独应用组略有提升，但缺乏统计学意义(P>0.05)。
结论：⑴Olomoucine于脊髓损伤后早期可通过抑制小胶质细胞的增殖与炎症反应，减小脊髓内再出血以及坏死软化灶的范围，从而使空洞面积相对减小，一定程度上促进肢体运动功能的恢复。⑵GDA可通过细胞迁徙、增生、分泌细胞外基质等作用，填充修复损伤脊髓内的空洞区域，同时，可通过抑制脊髓内胶质瘢痕形成、促进宿主组织星形胶质细胞突起重排、以及延迟抑制性因子分泌等机制，从而促进轴突的再生。显著提升肢体的运动功能。⑶Olomoucme与GDA联合应用时，无明显协同作用。
方法：⑴取健康清洁级SDE13.5天孕鼠胚胎脊髓，分离并培养GRP细胞，以BMP4诱导，获得GDA。⑵以72只清洁级SD雌性大鼠(200±20g)为受试对象，运用NYU打击器采用Allens法制成大鼠脊髓损伤模型。按处理因素不同将其随机分为4组：空白对照、Olomoucine、GDA以及联合治疗组，每组大鼠18只，分别于造模给药处理后第4天、8天、15天、22天及第29天时观察记录大鼠后肢活动及行走情况，进行BBB功能评分测定，比较分析不同处理方式对大鼠后肢运动功能恢复的影响。⑶各组按免疫组化时间点的不同，随机分为3个亚组：分别于造模后第4天、8犬及第29天时安乐处死。每亚组大鼠6只，其中3只于处死前2周时行皮层BDA示踪，以标记运动轴突，3只于处死前7大时行脊髓BDA示踪，标记感觉轴突.大鼠处死后，心脏灌注，取脊髓，进行双重荧光免疫细胞化学法检测，经荧光图象分析系统观察和分析脊髓内空洞面积与脊髓总面积的比值、再生轴突数量、宿主星形胶质细胞突起夹角以及GFAP的表达程度。
结果：①Olomoucine和GDA均可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。其中，Olomoucin。组大鼠于全观察时间点，BBB评分均好于对照组(P<0.05)，但术后4天以后各时间段内增幅与对照组相比无差异(P>0.05)；而GDA组BBB虽于术后第4天时与对照组相比无差异，但于此后的4.22天时间段内却能明显提高BBB的增幅(P<0.05)，BBB于术后第8天时好于对照组(P<0.05)，15天以后与对照组差异显著(P<0.001)，22天以后则同时显著好于Olomoucine组(P<0.01)；GDA与Olomoucine联合使用后，大鼠BBB于术后第4天时即好于对照组(P<0.05)，与Olomoucine组的显著差别亦较早体现(术后第15天起，P<0.01)，但远期效果与GDA单独应用组之间并无明显差异(术后第29天，P>0.05)，各时间段内的增幅与单独应用GDA组相比，亦未有明显提高(P>0.05)。②Olomoucine和GDA都可减小大鼠脊髓损伤后脊髓内空洞的面积(P<0.001)。不同之处在于，Olomoucine组脊髓内空洞面积随时间推移而逐渐增大，而GDA组脊髓内空洞面积则随时间推移而减小，二者联合使用后，其空洞面积特征早期与Olomoucine相似(术后第4、8天，P>0.05)，最终面积也小于GDA单独组(术后第29天)，但二者间差异并无统计学意义(P>0.05)。③GDA可明显抑制脊髓内胶质瘢痕的形成，减少GFAP的表达(P<0.01)，而Olomoucine无此作用(P>0.05)，GDA与Olomoucine联合使用后，GFAP含量与GDA单独应用组相比无统计学差异(P>0.05)。④脊髓损伤后，脊髓内星形胶质细胞增生，发生胶质化反应，其突起如网格状杂乱无章，平均夹角达67.25；Olomoucine组夹角与对照组相比无明显差异(P>0.05)；而GDA组宿主星形胶质细胞突起线性良好，平均夹角约35°，显著低于Olmoucine和对照组(P<0.001)；GDA与Olomoucine联合使用后，对胶质化的抑制作用无明显改变(P>0.05)。⑤Olomoucine于损伤各水平感觉轴突数量均明显高于空白对照组(P<0.01)，提示其能够促进轴突的生长；GDA使感觉轴突在损伤各水平的数量显著提高，44％到达损伤中心，并最终有7.1％的感觉轴突能到达损伤头侧5mm处，结果均明显好于Olomoucine(P<0.01)；GDA与Olomoucinc联合使用后，于各损伤水平的感觉轴突数量较GDA单独应用组相比并无明显改变(P>0.05)，于损伤头侧5mm处甚至低于单独应用组(P>0.05)，提示二者联用时，促进感觉轴突生长的协同作用不明显。⑥Olomoucine能够增加进入损伤头侧边缘以及损伤中心的运动轴突数量(P<0.01)，但其无力促进轴突穿过损伤区域，并穿出尾侧边缘(P>0.05)；GDA使运动轴突在损伤各水平的数量都显著提高(P<0.01)，42％到达损伤中心，并最终有4.6％的运动轴突能到达损伤尾侧5mm处，明显优于Olomoucine(P<0.01)；GDA与Olomoucine联合使用后，于各损伤水平的运动轴突数量较GDA单独应用组略有提升，但缺乏统计学意义(P>0.05)。
结论：⑴Olomoucine于脊髓损伤后早期可通过抑制小胶质细胞的增殖与炎症反应，减小脊髓内再出血以及坏死软化灶的范围，从而使空洞面积相对减小，一定程度上促进肢体运动功能的恢复。⑵GDA可通过细胞迁徙、增生、分泌细胞外基质等作用，填充修复损伤脊髓内的空洞区域，同时，可通过抑制脊髓内胶质瘢痕形成、促进宿主组织星形胶质细胞突起重排、以及延迟抑制性因子分泌等机制，从而促进轴突的再生。显著提升肢体的运动功能。⑶Olomoucme与GDA联合应用时，无明显协同作用。