去STAT3作用防龋DNA疫苗的研制

来源 :中华口腔医学会牙体牙髓病学专业委员会第五次全国牙体牙髓病学临床学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vincent1115
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  目的:树突状细胞在特异性免疫反应的诱导中起了关键作用。树突状细胞的成熟又是其发挥作用的关键过程。研究表明转录激活因子蛋白3(STAT3)在树突状细胞成熟过程中起了重要的负调控作用。本研究的目的是应用shRNA抑制STAT3的表达,以促进树突状细胞成熟和有利于防龋DNA疫苗诱导免疫反应的作用。方法:将已经确定具有良好抑制STAT3表达的shRNA片段经NotI和EcoRI酶切和末端平滑处理后克隆到pGJA-P/VAX中的NruI位点,构建出了能够表达小鼠STAT3基因的shRNA表达质粒的防龋DNA疫苗(71456/V),该shRNA所针对的STAT3序列在人和小鼠中完全一致。设立表达非特异性shRNA的防龋DNA疫苗(SHC/V)作为对照。将制备好的质粒分别转染293细胞,用western杂交检测抗原的表达和STAT3的表达水平。结果:构建的携带shRNA的防龋DNA疫苗,经序列测定正确;转染细胞后可以检测到抗原的表达;用抗STAT3抗体检测发现疫苗所携带的shRNA可以有效地抑制STAT3的表达。结论:成功构建了携带shRNA并有效抑制STAT3的防龋DNA疫苗。
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目的:探讨分离培养猪牙髓干细胞(Swine dental pulp stem cells,sDPSCs)的方法,为本项目下一步的研究及牙成体干细胞的应用提供理论基础.方法:六月龄猪磨牙获取牙髓;采用酶消化法获取sDPSCs,取第一代细胞为研究对象计算细胞集落形成率(colony-forming unit,CFU);采用免疫荧光等技术检测sDPSCs标记物;体外诱导细胞成骨、成脂分化.结果:酶消化法
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