【摘 要】
：
目的：应用PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道标本中的细菌,为临床诊断提供快速、准确的依据,并逐步开发检测泌尿生殖道感染菌的基因芯片,用于临床诊断.方法:利用细菌16SrRNA集保守性和变异性于一身的特点,合成一对通用引物,其上游5端用5-FAM标记.将8株已知菌株和38例临床诊断为生殖道炎症的女性生殖道拭子标本及其培养物进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶HaeⅢ消化,然后进行毛细管电
【机 构】
：
大连市妇产医院,大连,116021 大连医科大学,大连,116027
【出 处】
：
第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会
论文部分内容阅读
目的：应用PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道标本中的细菌,为临床诊断提供快速、准确的依据,并逐步开发检测泌尿生殖道感染菌的基因芯片,用于临床诊断.
方法:利用细菌16SrRNA集保守性和变异性于一身的特点,合成一对通用引物,其上游5端用5-FAM标记.将8株已知菌株和38例临床诊断为生殖道炎症的女性生殖道拭子标本及其培养物进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶HaeⅢ消化,然后进行毛细管电泳,通过限制性片断长度多态性(Restriction-Fragment-LengthPolymorphism,RFLP)分析来鉴定不同病原菌.
结果:①已知菌株PCR扩增阳性率为75﹪(6/8)、毛细管电泳阳性率为100﹪(6/6).②生殖道感染的标本pCR扩增阳性率为79﹪(30/38),毛细管电泳阳性率为100﹪(30/30).③已知菌株PCR扩增产物的5端HaeⅢ完全酶切片段的毛细管电泳结果,与电子克隆产物的酶切片段基本一致.④用传统培养检测法在生殖道常见的致病菌中,可检出有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌,本实验用PCR-CE-RFLP法同样也能检测出来.⑤本实验还发现数种传统培养法未检出的细菌(即未定菌).
结论:PCR-CE-RFLP法比传统的细菌培养法具有快速、准确、灵敏的优点,比传统方法缩短20小时,可用于临床标本的直接鉴定.
其他文献
高效联合抗病毒疗法(highlyactiveantiretroviraltherapy,HAART)是从1995年开始广泛应用于临床的艾滋病抗病毒治疗方法.这种方法将作用于病毒复制不同环节的抗病毒药物联合使用,能够大幅降低病毒载量、减少机会性感染、获得免疫重建、显著降低HIV/AIDS相关疾病的发病率和病死率.目前,高效联合抗病毒疗法(HAART)仍是艾滋病的标准治疗方法.美国食品及药物管理局(F
将合成吗啡人工抗原"MOP-BSA","OVA-MOP"免疫新西兰大白兔,在免疫过程中用间接ELISA法检测,证明得到了高效价的多抗血清,提取血清中的抗吗啡多克隆抗体,纯化后抗体纯度达到95﹪,用间接竞争ELISA检测,该抗体对吗啡有特异性反应,从而证实了成功的制备了抗吗啡抗体,可以用于吗啡免疫学检测方法的研究.
目的：用SARS-CoV抗原免疫鸡后纯化制备卵黄免疫球蛋白的方法.方法:卵黄液-20℃低温冻融后两步硫酸铵沉淀,并0.02MpH7.0Tris透析.结果:从还原SDS-PAGE电泳图可以看出,经过上述方法纯化的IgY纯度高,重链65KD,轻链30KD左右.同时,每个卵黄中我们可以获得128mg～¨0mg的特异性抗体.结论:该方法从卵黄中可以获得大量的抗体,且制备简单、方便,抗体效价高、纯度高,适合
目的：制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖(GM)蛋白单克隆抗体。方法：培养烟曲霉孢子免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体.间接ELISA法和免疫荧光法筛选抗曲霉菌GM蛋白的单克隆抗体.Western免疫印迹鉴定抗体特异性.结果：获得3株稳定分泌同时抗烟曲霉、黄曲霉、土曲霉、黑曲霉菌GM蛋白的杂交瘤细胞株,Ig亚类鉴定为IgG1、IgG3、IgM.Western免疫印迹证实3株单抗与进口检测GM试剂盒中酶结合
自1991年Holland等率先提出一种利用双标记寡核苷酸杂交探针和DNA聚合酶的5端外切酶活性检测的PCR方法到1996年由美国AppliedBiosystems公司推出成熟的荧光定量PCR技术,该方法不断完善发展并以特异性强、精确定量、能有效解决了PCR易污染和避免一般PCR扩增平台问题,实时荧光定量PCR技术广泛应用于核酸定量等领域.本文探讨，1实时荧光定量PCR的原理，2实时荧光定量PCR
目的：建立毛细管区带电泳法(CZE)和毛细管区带电泳免疫削减法(IS-CZE)对M蛋白进行筛检和鉴定,并与琼脂糖凝胶电泳(AGE)和免疫固定电泳(IFE)结果相比较.方法：运用毛细管区带电泳(CZE)和琼脂糖凝胶电泳(AGE)分别对532例血清进行M蛋白的筛检;用毛细管区带电泳免疫削减法(IS-CZE)和免疫固定电泳(IFE)对M蛋白阳性的64例标本进行免疫分型。结果：与AGE相比较,CZE筛检M
本文以金溶胶颗粒作为免疫配基的载体,建立了胶体金免疫凝集抑制试验以定量测定尿微量白蛋白.本试验体系中金溶胶颗粒的适当粒径为50-70nm,以硼酸-硼砂缓冲液作为反应缓冲液消除了金溶胶在尿液介质中的絮状凝集,3﹪终浓度的聚乙二醇6000则保证了凝集反应的充分进行.本方法标准曲线的线性范围为40～200mg/L,适合于尿微量白蛋白的检测.用本法测定了103例临床尿液标本,并与全自动蛋白质分析仪上散射速
过去认为,脂肪细胞在外界刺激下被动地储存和释放能量.1994年瘦素的发现,使人们认识到脂肪组织是主动参与能量代谢调节的组织.它分泌多种生物活性物质-脂肪因子,调节自身和其他组织的功能.脂肪因子可调节胰岛素的敏感性,与糖尿病的发生发展有关.瘦素具有广泛的生物学特性,作用于下丘脑的体重调节中枢,引起食欲减退,体重减轻,这是对它的最初认识,经进一步的研究发现瘦素与生殖、免疫等系统有关,它还参与内分泌的调
目的：比较两种不同方法的试剂盒检测急、慢性乙肝和其他病毒性肝炎及类风湿患者血清抗HBcIgM的结果.方法：用酶联免疫法(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)同步平行检测乙肝和其他肝炎共493份血清样品,比较ELISA与MEIA的符合情况,对两种方法不符合的标本,结合临床病历和其它化验数据,分析检测结果.结果：206份MEIA检测为阳性的血清标本,ELISA检出205份,阳性检出率为99.5
目的：开发快速检测耐利福平和/或异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变的DNA芯片.方法：根据结核杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物