【摘 要】
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目的：探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶(MEKK3)在TNF-α刺激后的肺癌A549和乳腺癌MDAMB-231细胞所产生的IL-6中的作用. 方法：应用EUSA测定IL-6的产生,Western blot测定MEKK3的
【机 构】
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南京军区福州总医院分子医学研究中心
【出 处】
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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会
论文部分内容阅读
目的：探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶(MEKK3)在TNF-α刺激后的肺癌A549和乳腺癌MDAMB-231细胞所产生的IL-6中的作用.
方法：应用EUSA测定IL-6的产生,Western blot测定MEKK3的激活（磷酸化）,构建针对MEKK3基因的shRNA载体及真核表达载体,再以脂质体(Lipofectamine2000)分别将其转染入A549和MDA-MB-231细胞中,通过潮霉素筛选获得稳定转染的MEKK3低表达和高表达的细胞克隆,荧光实时定量PCR(Real-time PCR)确定MEKK3的表达量,RT-PCR和EUSA检测TNF-α刺激未转染细胞（野生株）、MEKK3低表达的、将MEKK3基因重新转染入MEKK3低表达的及阴性对照稳定转染细胞克隆株、MEKK3高表达的及空载体稳定细胞克隆株中IL-6的表达或产生.
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