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目的评价结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c、Rv2659c、Rv2628及Rv1813c对活动性感染与潜伏感染鉴别诊断价值。方法应用基因工程技术克隆、表达并纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c、Rv2659c、Rv2628及Rv1813c。用4种重组蛋白刺激376例中国人PBMC,其中未感染结核健康对照组103例、结核潜伏感染组51例、活动性结核病组116例、BCG接种组49例(Rv1813c无此组)、非结核呼吸疾病组57例,用ELISPOT技术检测分泌IFN-γ的效应T细胞斑点数(SFC),比较其在不同人群中的差异;以潜伏感染组为阳性组,以活动性结核病组为阴性组,绘制各个潜伏抗原的ROC曲线,在特异度80%及90%两个点取SFC的cut-off值,以此评价并且比较潜伏感染蛋白对结核活动性感染与潜伏感染的鉴别诊断效能。结果 (1)本研究制备并获得纯度较高的4种重组蛋白。(2)4种重组蛋白刺激中国潜伏感染人群后分泌IFN-γ的效应T细胞数显著高于活动性结核病组(P<0.05),也显著高于未感染正常对照组(P<0.05);Rv2029c、Rv2659c、Rv1813c在非结核呼吸疾病组显著低于结核潜伏感染组(p<0.05),Rv2628在非结核呼吸疾病组低于潜伏感染组,但差异不明显(P>0.05),与未感染健康对照组无显著差别(P>0.05);BCG接种3个月后PPD阳转者与健康对照组潜伏蛋白特异的SFC值进行比较,两者之间差异不明显(P>0.05),BCG接种前后潜伏感染蛋白刺激的SFC值差异无统计学意义(P>0.05)。(3)ROC曲线分析结果:Rv2029c蛋白的曲线下面积最高达到89.1%,高于Rv2659c(69.9%)、Rv2628(68.8%)及Rv1813c(39%)。Rv2029c、Rv2659c及Rv2628蛋白诱导潜伏感染组产生细胞免疫应答的阳性率最高。进一步评价各潜伏蛋白对鉴别结核活动感染与潜伏感染效能,Rv2029c敏感度最高,在潜伏感染人群中的阳性率达到80%以上,但在未感染结核的健康组和活动性结核病组的假阳性率较高;Rv2659c虽然敏感度不及Rv2029c,但其在未感染结核的健康组和活动性结核病组的假阳性率低;Rv2628的敏感度与Rv2659c相当,但其假阳性率高于Rv2659c,低于Rv2029c。结论 (1)本研究成功地构建了4种高表达结核潜伏感染相关蛋白的基因工程菌株。(2)Rv2029c、Rv2659c、Rv2628及Rv1813c可被结核潜伏感染人群识别,诱导其效应T细胞产生的免疫应答强于活动性结核病患者,且不受BCG接种(Rv1813c无此组)及其他非结核感染因素影响。(3)重组Rv2659c蛋白通过ELISPOT技术诊断结核潜伏感染、鉴别活动性结核感染的效能最高,有望成为针对中国人群结核潜伏感染的新型诊断标志物。总之,本研究结果为其潜伏感染相关抗原的研究奠定了基础,也为潜伏感染诊断标志物及潜伏感染疫苗的研究提供了丰富的实验依据。