引言鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Viru,DTMUV)又名鸭黄病毒,主要引起种鸭和蛋鸭食欲急剧减退、产蛋急剧下降,卵泡变性,卵泡膜出血为主要特征。感染DuCV后的病鸭主要临床表现为发育不良、体重下降及羽毛凌乱等,病理组织表现为法氏囊出现坏死淋巴细胞减少和组织细胞增多,导致感染鸭免疫功能下降或免疫反应抑制,因此DuCV与其它病原菌或病毒的混合感染情形非常复杂,常可引起二重或多重感染。由于DTMUV与DuCV均为严重危害养鸭业的传染病,特别是有混合感染时,迫切需要建立一种快速鉴别诊断两种病毒的方法。本研究设计了2对特异性引物,建立了DTMUV与DuCV的二重RT-PCR的检测方法。材料与方法应用本实验室分离到的鸭坦布苏病毒及鸭圆环病毒的核酸为模板,建立同时检测鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒的二重PCR方法。本实验针对GenBank中坦布苏病毒(DTMUV)E基因和鸭圆环病毒(DuCV)REP基因的保守序列,设计合成了两对引物。通过优化反应体系条件及特异性、敏感性评价,建立了鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒的二重RT-PCR方法。结果与讨论同时使用该方法对新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒的进行检测,结果全为阴性,特异性良好。该方法对鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒,同时体系能检出100FGDTMUV和DuCV,具有很高的敏感性,完全能够满足这两种疫病检测的要求。用本研究建立的DTMUV和DuCV的二重RT-PCR检测技术,对从2012年10月至2013年4月的采集的40份鸭病料进行检测,与病毒分离鉴定方法得出的结果一致。因此,本研究建立的二重RT-PCR检测方法可用于快速检测的DTVUV和DuCV的混合感染,既可节约时间和成本,又能减少污染,具有很高的使用价值和实践意义。