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目的:在已构建的高复杂度的随机siRNA文库的基础上,对哺乳动物细胞进行高通量功能筛选以获得与细胞增殖相关的siRNA和基因。
方法:将随机siRNA文库转染小鼠MC3T3-E1细胞,通过连续传代培养使得因表达某种siRNA而获得增殖加快表型的细胞在传代过程中逐渐得到富集。分析测序结果可得到此类细胞中所转染的siRNA序列及其可能针对的靶基因。对这些siRNA的逐个验证证实了其中能促进细胞增殖的一组siRNA。通过基因芯片和Realtime实验,分析转染了上述促细胞增殖的siRNA后细胞中表达水平发生改变的基因谱。克隆表达水平发生改变的基因、过表达或RNA干扰下调其表达后,检测其促细胞增殖的能力。
结果:通过对随机siRNA文库的高通量筛选,获取了一批与MC3T3细胞增殖相关的siRNA及其可能调控的下游基因(包括功能已知的和未知的基因)。
结论:我们建立了一个siRNA大规模筛选平台,为后基因组时代哺乳动物功能基因的系统性研究提供了新的思路和手段。此外,对这些新的细胞增殖相关siRNA和基因的研究也将有助于更好的理解细胞增殖的机制。