【摘 要】
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本研究利用shRNA、siRNA,在3T3L1前脂肪细胞、人乳腺癌细胞MCF7及人肺癌细胞Huh7等细胞中干扰AS160的表达,经MTS法或DAPI染核后荧光显微镜扫描分析细胞增殖情况.将干扰AS160
【机 构】
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中国科学院昆明植物研究所,植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室
【出 处】
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第十一届西南三省一市生物化学与分子生物学学术研讨会
论文部分内容阅读
本研究利用shRNA、siRNA,在3T3L1前脂肪细胞、人乳腺癌细胞MCF7及人肺癌细胞Huh7等细胞中干扰AS160的表达,经MTS法或DAPI染核后荧光显微镜扫描分析细胞增殖情况.将干扰AS160表达的细胞及对照用P1染色后,用流式细胞仪检测周期及凋亡情况.用试剂盒检测AS160表达下调组与对照组3T3L1前脂肪细胞对葡萄糖的摄取及乳酸释放情况.将3T3L1前脂肪细胞经胰岛素、IBMX、地塞米松、罗格列酮混合液诱导分化为成熟脂肪细胞,并将携带HA-GLUT4-GFP的载体通过电穿孔瞬时表达于分化后的3T3L1细胞.对细胞膜上HA进行免疫荧光染色后,用荧光显微镜双通道采集图像,通过Metamorph软件分析荧光强度,观察AS160对GLUT4上膜的影响.利用QPCR及Westernblotting检测AS160及其他相关基因的mRNA及蛋白水平.通过重新过表达AS160及双干扰手段进一步确认AS160影响细胞增殖的原因.
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