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目的研究山豆根对C57BL/6小鼠的亚慢性肝毒性,并检测鉴定研究所用的山豆根药材是否符合《中华人民共和国药典》中的质量标准。方法用HPLC检测山豆根浸膏中主要有效和毒性成分金雀花碱(Cytisin),苦参碱(Matrine)和氧化苦参碱(Oxymatrine)的含量,同时对线性关系,精密度,准确性,加标回收率等方面进行考察。选取体质量在18~20g的健康C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组(给予同等容积的三蒸水)、山豆根低、中、高剂量组(即4.8、9.6、12g/kg),每组8只,依据每周动物体质量调整受试物量,连续灌胃给药90天。第91天所有受试小鼠均用乙醚麻醉,腹主动脉采血,离心取血清,用全自动生化分析仪检测小鼠血清中ALT、AST、TP、ALB、GLO、ALP、TBA、BUN、CREA、CK、LDH、CHE等各项血液生化指标。取小鼠肝脏置于10%中性福尔马林中固定,用于病理组织学检查。结果(1)检测鉴定山豆根药材:①方法学考察:线性关系考察结果:金雀花碱的回归方程为y=3.0392x+0.0728(R~2=1),苦参碱的回归方程为y=4.1712x+0.996(R~2=0.9999),氧化苦参碱的回归方程为y=4.7696x+3.2866(R~2=0.9998),金雀花碱浓度在2.8~140μg/ml范围内,苦参碱浓度在3.16~158μg/ml范围内,氧化苦参碱浓度在4.48~224μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。精密吸取一定含量的金雀花碱、苦参碱和氧化苦参碱混合标准品溶液,以5ul为进样量,连续进样5次,测定金雀花碱、苦参碱、氧化苦参碱的峰面积RSD分别为2.185%、0.557%、1.294%,表明仪器的精密度好。进行加标回收率的考察,取已知含量的浸膏粉0.196g,精密称取金雀花碱标准品0.88mg,苦参碱标准品4.33mg,氧化苦参碱标准品2.54mg加入其中,加甲醇定容至25ml,后取1ml加超纯水定容至10ml,即得加标量为80%的进样溶液。同法可得加标量为100%和120%的进样溶液。各取5ul进样,各进3针,计算金雀花碱平均回收率为94.30%,RSD为3.1 80%,苦参碱平均回收率为104.44%,RSD为1.070%,氧化苦参碱的平均回收率为98.17%,RSD为3.280%。②经检测结果计算可得本研究所用的山豆根药材中苦参碱的含量为0.601%,氧化苦参碱含量为0.352%(符合2010版《中华人民共和国药典》中所要求的山豆根干燥品中苦参碱和氧化苦参碱的总量不得少于0.70%)。(2)在山豆根给药期间,中、高剂量组小鼠出现活动减少、动作迟缓、精神不振、俯卧和闭眼等症状。与对照组相比,高剂量组从给药49d起体质量开始显著降低(P<0.05),在给药70d后,中剂量组体质量显著降低(P<0.05),高剂量组小鼠体质量明显下降(P<0.01)。实验结束时,各组血液生化指标与对照组相比,均无生物学显著性。在病理组织学检查中发现,高剂量组出现轻度到中度的小叶中心性肝细胞肥大。结论山豆根有一定的肝毒性,且该HPLC检测方法可同时测定金雀花碱、苦参碱和氧化苦参碱的含量,可为进一步研究山豆根中各主要生物碱的肝毒性提供依据。