稳定细胞骨架对EPCs功能的影响

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目的:借助肌动蛋白稳定剂——Jasplakinolide(JASP)研究稳定细胞骨架对骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitorcells,EPCs)迁移、粘附、分泌及凋亡等生理功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离、培养SD大鼠骨髓单个核细胞,7天后经FITC-UEA-I和Dil-acLDL染色,双阳性细胞为正在分化的EPCs。以4~6代细胞为靶细胞,采用细胞免疫荧光染色法观察50nmol/L、100 nmol/L及200 nmol/LJASP作用不同时间后后对EPCs细胞骨架的影响;HE染色法观察EPCs形态的变化;以细胞计数法、Boyden小室、荧光定量RT-PCR、ELISA及流式细胞术法检测JASP(100 nmol/L)处理1 h对EPCs粘附、迁移、CXCR-4基因表达、NO生成及凋亡的影响。结果:1)JASP对EPCs细胞骨架的作用具有时间和浓度依赖性。50 nmol/LJASP处理2h、100 nmol/LJASP处理1h及200 nmol/LJASP处理30min后细胞骨架明显变粗,荧光强度增加。100 nmol/LJASP作用1 h后细胞形态变化不大,而作用2 h后,细胞出现明显形态学改变,例如胞体变圆、变小。2)100 nmol/L的JASP作用1 h后可明显降低EPCs的粘附、迁移功能,上调CXCR-4基因的表达,增加NO的分泌,抑制EPCs的凋亡。结论:JASP可通过改变肌动蛋白细胞骨架影响EPCs的生理功能,提示内皮祖细胞的生理功能与其细胞骨架的结构密切相关。
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