【摘 要】
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在G蛋白信号传导通路中,G蛋白偶联受体作为激活G蛋白的胞外信号感知器,在真菌适应复杂多变的环境中具有重要作用。在尖孢镰刀菌中这类受体尚无相关研究报道。为鉴定尖孢镰刀
【机 构】
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中国热带农业科学院环境与植物保护研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31201467)
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在G蛋白信号传导通路中,G蛋白偶联受体作为激活G蛋白的胞外信号感知器,在真菌适应复杂多变的环境中具有重要作用。在尖孢镰刀菌中这类受体尚无相关研究报道。为鉴定尖孢镰刀菌G蛋白偶联受体,采用电子克隆方法从尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种基因组序列中获得70多个假定的G蛋白偶联受体(包括FTH11类似受体)。其中Fogpr1与芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)的蔗糖感应受体Gpr1、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)发育和毒力相关的受体GprD在假定的氨基酸序列上较为相似,暗示Fogpr1可能参与生长发育和致病性。为验证该假设,采用基因敲除策略将尖孢镰刀菌古巴专化型的Fogpr1敲除。与野生型菌株相比,△Fogpr 1突变体在不同碳源培养基上的菌落生长和形态没有明显改变,其对过氧化氢的氧化胁迫和山梨醇高渗透胁迫的适应没有显著改变,对香蕉巴西蕉品种(Musa spp.AAA,Brazil)的致病性也没有显著减弱,表明Fogpr1可能不参与尖孢镰刀菌生长发育、胁迫响应和毒力的调控。采用酵母双杂系统(Matchmaker-Gold Yeast Two-Hybrid System)验证Fogpr1蛋白与G蛋白亚基的互作,发现其编码的2个胞内肽段(48.109,344.-479)与G蛋白仅亚基Fga1、β亚基Fgb1和γ亚基Fgg存在互作。此外,共聚焦显微观察Four1:GFP融合蛋白表达菌株,发现Fogpr1:GFP融合蛋白主要定位于胞内的胞质中。综上研究结果推测Fogpr1编码的蛋白可能不是一个G蛋白偶联受体,不参与尖孢镰刀菌生长发育和毒力的调控。
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