【摘 要】
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目的 1.通过体外和体内实验检测RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461对骨肉瘤细胞的抗肿瘤效果.2.探讨CX-5461抗骨肉瘤细胞增殖的分子机制.方法 1.选取骨肉瘤细胞系MNNG/HOS,MG63,Saos-2,U2OS和正常细胞NIH3T3体外培养,通过MTT assay 观察CX-5461的时间依存性和剂量依存性的细胞杀伤作用.2.CX-5461对MNNG/HOS,MG63,Saos-2和 U2
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的 1.通过体外和体内实验检测RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461对骨肉瘤细胞的抗肿瘤效果.2.探讨CX-5461抗骨肉瘤细胞增殖的分子机制.方法 1.选取骨肉瘤细胞系MNNG/HOS,MG63,Saos-2,U2OS和正常细胞NIH3T3体外培养,通过MTT assay 观察CX-5461的时间依存性和剂量依存性的细胞杀伤作用.2.CX-5461对MNNG/HOS,MG63,Saos-2和 U2OS 四种细胞诱导时间、剂量依存性死亡后通过检测细胞周期变化,电镜自噬体,cleaved PARP,LC3B-Ⅱ蛋白表达,β--半乳糖苷酶染色,明确CX-5461在骨肉瘤细胞中的死亡诱导方式；通过细胞活性分析和免疫印迹法明确CX-5461在阿霉素诱导骨肉瘤细胞死亡过程中的协同作用；通过real-time PCR和 Western blot 检测CX-5461作用后p53及其下游因子p21等的mRNA和蛋白表达情况；利用caspase抑制剂,自噬抑制剂(3-MA)反向抑制CX-5461对骨肉瘤细胞的杀伤作用,明确其诱导的主要死亡方式.3.通过Western blotting 检测Caspases,cytochrome c,p53,ARF,AKT,AMPK,mTOR,ATG5/7,beclin1/BclxL蛋白表达,明确CX-5461在骨肉瘤细胞中诱导骨肉瘤细胞凋亡和自噬的途径.通过p53 siRNA转染技术,明确p53在CX-5461诱导骨肉瘤细胞死亡过程中的作用.4.选取Balb/c裸鼠随机分组,皮下注射骨肉瘤细胞建立核瘤裸鼠模型,每天腹腔注射CX-5461和阿霉素,检测裸鼠体重和核瘤大小,计算肿瘤体积.
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