【摘 要】
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Dirigent-like (DIR)基因编码的蛋白质参与木质素的形成,与植物体的病菌防御有关.有研究报道陆地棉GhDIR1可增加下胚轴木质素含量,有效阻滞大丽轮枝菌在棉花组织中的扩展
【机 构】
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河南省农业科学院经济作物研究所,郑州450002
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Dirigent-like (DIR)基因编码的蛋白质参与木质素的形成,与植物体的病菌防御有关.有研究报道陆地棉GhDIR1可增加下胚轴木质素含量,有效阻滞大丽轮枝菌在棉花组织中的扩展.本课题组构建的黄萎病菌诱导下抗病陆地棉豫棉21号SSH文库,以上调表达基因DIR的EST为信息探针,利用电子克隆的方法,获得了陆地棉DIR基因的cDNA全长序列,命名为GhDIRL (Genebank ID JX096805).q-PCR结果表明该基因在棉苗中受黄萎病菌诱导上调表达.为了验证GhDIRL的抗黄萎病功能,构建了植物超表达载体,通过蘸花絮法转化了拟南芥,筛选到纯合F3转基因株,接菌抗病鉴定表明转基因拟南芥抗病性比野生型显著提高；构建VIGS载体,注射转化抗病品种豫棉21号,接菌鉴定结果,病指从15.7提高到40.1,表明DIR的抑制导致陆地棉感病；同时测试棉苗下胚轴的木质素含量,VIGS-GhDIRL转化株下胚轴木质素含量比对照下降27.2％.已将该基因通过基因枪导入感病品种冀棉11号,初步筛选到转基因阳性苗252株,基因拷贝数等有待进一步鉴定.这些研究为进一步验证GhDIRL的大田抗黄萎病功能,进而创制抗病棉花新种质奠定了基础.
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