温化胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞增殖和细胞周期的影响

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目的:研究温化胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞增殖和细胞周期的影响。方法:实验分四个阶段进行。第一阶段,使用高效液相色谱法对温化胶囊进行指纹图谱分析, 并以乌头碱标准品为对照定量分析温化胶囊所含乌头碱,第二阶段,对MCF-7细胞株进行体外细胞培养,设立空白对照组、75 μ g/ml温化胶囊组及250 μg/ml温化胶囊组3组, 观察7天,绘制生长曲线,采用重复测量的方差分析法对细胞生长曲线进行线间比较。利用倒置相差显微镜观察加药前后细胞的形态学改变。第三阶段,使用流式细胞仪分析温化胶囊对MCF-7细胞株细胞周期的调控作用。第四阶段,研究温化胶囊联合5-Fu对MCF-7细胞增殖的影响。常规培养细胞,分6组进行实验:空白对照组、75μg/ml温化胶囊组、 250 μg/ml温化胶囊组、1 μg/ml 5-Fu组、7 5 μg/ml温化胶囊联合1μg/ml 5-Fu组、250μg/ml温化胶囊联合1μg/ml 5-Fu组,绘制生长曲线,计算细胞倍增时间。通过计算死亡细胞比例比较6组间细胞毒作用的强弱。结果:绘制出温化胶囊高效液相色谱指纹图谱,测得温化胶囊乌头碱含量为1.01±0.01μg。温化胶囊对MCF-7细胞具有增殖抑制作用,其作用的强度与药物剂量呈正相关。细胞形态学观察发现,加入温化胶囊后MCF-7细胞质内出现空泡样结构。随着药物作用时间的延长,空泡样结构的数量进行性增加,并可融合成大泡。流式细胞仪检查显示:与对照组相比,加药后S期细胞的比例显著升高。在第四阶段研究中, 温化胶囊联合5-Fu组的增殖抑制作用强于其它各组,但联合药物组75 μg/ml和250 μg/ml两个剂量之间比较无差别。结论:温化胶囊为纯中药复方制剂,工艺成熟,使用安全。实验中温化胶囊表现出明显的细胞毒作用,并能进行细胞周期调控,使细胞阻滞于S期。配合作用于S期的细胞周期特异性药物5-氟脲嘧啶,可增强药物的细胞增殖抑制作用。温化胶囊导致S期阻滞的机制尚需进一步研究探讨。
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