【摘 要】
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利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区，其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下，大肠杆菌报告基因LacZ在晚期启动子P11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因Lac
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京 100094 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验
【出 处】
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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会
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利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区，其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下，大肠杆菌报告基因LacZ在晚期启动子P11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ的重组鸡痘病毒，称为rFPV-F/HN/gB/LacZ。经PCR方法证明rFPV-F/HN/gB/LacZ基因组中含有NDV的F基因、HN基因和ILTVgB基因；间接免疫荧光试验和Western-blot试验表明NDV的F、HN蛋白和ILTV gB蛋白在rFPV-F/HN/gB/LacZ感染的CEF细胞中获得表达。与亲本毒相比，重组病毒在病毒的复制和致鸡胚成纤维细胞的病变方面无显著不同。本研究证明了在鸡痘病毒载体的一个复制非必需区可以同时插入多个禽类病原的多个外源基因，为制备多价基因工程疫苗奠定了基础。
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兽用活疫苗耐热冻干保护剂应用研究课题是广东省2003年科技计划项目，已完成包括原材料性能研究和选择，配方组成和筛选改良、配制和除菌方法试验、应用效果和保存期测定、冻干曲线制定、产品效力和安全性检验等。本文对主要研究结果进行了总结。
采用猪大肠杆菌C83549(O149：K88ac)、c83644(068：K99)、C83710(09：987P)菌株制备抗原，以蜂胶为佐剂，研制仔猪大肠杆菌病三价蜂胶灭活疫苗，疫苗成品各项检验均符合相关要求。将疫苗免疫妊娠母猪并用凝集试验测定其所产仔猪的抗体消长规律，并研究疫苗免疫保护情况。结果表明：妊娠母猪产前40天和15天各免疫1次所产仔猪母源抗体效价较高，仔猪在整个哺乳期都可以得到保护。同
从B型产气荚膜梭菌C58-2中扩增出了ε毒素完整成熟肽基因的片段，克隆到pGEM-T Easy载体后，选取阳性重组子，经PCR和双酶切鉴定后，提取质粒并双酶切，最终克隆到pET28a载体中，并转化到BL21(DE3)受体菌中，经PCR、双酶切和测序鉴定，表明目的片段已成功的克隆到pET28a中；用IPTG对重组菌进行了诱导表达，SDS-PAGE结果表明，诱导后的菌体蛋白中多了一条蛋白带，且与预期的
用独立水提法从高免鸡卵黄中提取IgY，主要受pH值和免卵黄稀释倍数的影响。实验证明水提法适宜条件是：首次，将原始高免卵黄用10倍的蒸馏水做溶剂，pH值在6.00，静置孵化温度4℃、时间48小时，吸出上清中IgY提取率为75％；再次，将沉淀卵黄用8倍的蒸馏水做溶剂，pH值在6.00，静置孵化温度4℃、时间24小时，吸出上清中IgY提取率13％，合计IgY提取率可达到88％。
用鸡传染性法氏囊病活疫苗((K85株，下称IBD疫苗)对5个不同品种、不同母源抗体水平的小鸡进行免疫效果试验，1羽份一次免疫10日龄小鸡，不同试验组产生免疫反应有差别，对超强毒攻击的保护率平均为83.6％；分别用1羽份在10日龄、20日龄二次免疫小鸡，均可产生良好的免疫反应和对超强毒攻击的100％保护；用1羽份一次免疫20日龄低或无母源抗体的小鸡，均可产生良好的免疫反应和对超强毒攻击的100％保护
在实验室里试制了七批鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗样品，经物理性状、无菌检验、甲醛和硫柳汞含量测定、安全性检验和效力检验，各项指标均合格。
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