【摘 要】
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目的：建立一套稳定可靠的方法对具有过敏原性的物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。 方法：在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上设计兼并引物,用高
【机 构】
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汕头大学医学院变态反应与炎症研究所,汕头 515031
【出 处】
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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛
论文部分内容阅读
目的：建立一套稳定可靠的方法对具有过敏原性的物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。
方法：在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上设计兼并引物,用高质量葎草花粉RNA,逆转录合成cDNA,采用Touchdown方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增,同时借助梯度PCR仪对引物扩增的兼并性作进一步强化,并结合RACE技术获取全长cDNA,进而对葎草花粉中的过敏原同源基因进行克隆。
结果：成功地获得了3个全长cDNA克隆,序列分析显示这些基因与已知过敏原的序列相似性高迭79％～85％,初步认定其为泛过敏原Profilin的同源基因。对比RACE技术获得的相应基因的全长序列,发现这些序列在引物结合处与兼并引物序列之间存在4个碱基的差异,提示采用Touchdown方式的梯度PCR可以使引物的兼并性得到进一步扩展。
结论：兼并引物与Touchdown梯度PCR相结合的方法能够对以葎草为代表的基因组未曾深入研究的物种中的过敏原同源基因进行有效克隆。
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