【摘 要】
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默RAN基因对基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响.方法 根据siRNA设计原则设计针对RAN基因的siRNA序列,并构建、包装含有siRNA的慢病毒
【机 构】
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中国辐射防护研究院放射医学与环境医学研究所,山西太原030006
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默RAN基因对基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响.方法 根据siRNA设计原则设计针对RAN基因的siRNA序列,并构建、包装含有siRNA的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒感染人正常肝细胞HL-7702,利用实时荧光定量PCR进行RAN基因mRNA水平的检测,从而筛选有效RAN基因siRNA靶序列；将含有有效RAN基因siRNA靶序列的慢病毒感染基因组不稳定肝细胞,利用实时荧光定量PCR检测RAN基因mRNA的表达情况；Annexin V-APC FCM法检测RAN基因沉默后基因组不稳定肝细胞的凋亡情况；PI单染FCM法检测细胞周期情况.结果 在人正常肝细胞HL-7702中通过实时荧光定量PCR筛选获得有效RAN基因siRNA靶序列；实时荧光定量PCR对慢病毒感染基因组不稳定肝细胞RAN mRNA检测表明,RAN siRNA能有效沉默RAN基因的表达；RAN基因沉默诱发基因组不稳定肝细胞G1期细胞增加,发生G1期阻滞；RAN基因沉默后,细胞凋亡百分率(8.50±1.14)％较阴性对照组(41.64±13.45)％明显降低.结论 RAN基因可能通过参与细胞周期调控及促进细胞凋亡进而维持肝细胞基因组的稳定性.
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