肿瘤细胞来源IgG重链可变区特殊糖基模拟肽的初步研究

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研究背景和目的:作为一种泛肿瘤生物标志,CA215是多种肿瘤细胞来源的免疫球蛋白,其重链与人Ig G高度同源,但可变区存在可被单抗 RP215特异性识别的特殊糖基表位,可能成为新的肿瘤诊断与治疗靶标。但由于糖基结构是一种非蛋白成分的胸腺非依赖抗原(TI),免疫原性较弱,不能诱导T细胞介导免疫,而且在体内难以诱导有效而持久的保护性免疫。我们拟用噬菌体展示肽库技术,筛选模拟肿瘤细胞来源Ig G重链可变区特殊糖基结构的短肽,为研制抗肿瘤疫苗奠定基础。方法:用特异性识别CA215重链可变区特殊糖基表位的单克隆抗体 RP215作为捕获分子,筛选噬菌体12肽库,双夹心ELISA鉴定噬菌体克隆,根据阳性克隆的保守氨基酸序列合成线性肽并鉴定其与 RP215的结合。结果:对噬菌体12肽库进行3轮筛选后,得到23个可与 RP215结合的噬菌体克隆,经DNA序列分析显示,其中17个克隆的氨基酸序列具有四组保守序列特征,其余6个克隆的序列均不相同。通过双夹心ELISA选择,得到两个优势序列,根据此序列合成的线性肽和鼠Ig G交联后,经ELISA检测表明线性肽和交联物均可特异地和 RP215结合。以此交联物免疫小鼠所获抗血清可与CA215结合。结论:筛选得到的噬菌体克隆及合成线性肽可与 RP215结合,为肿瘤细胞来源Ig G重链可变区特殊糖基结构某段表位的模拟短肽。
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