柔嫩艾美耳球虫表面抗原Sag10基因的克隆及在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

来源 :中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nkxrb
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
提取Eimeria tenella北京株第二代裂殖子总RNA,根据sag10基因序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到Eimeria tenella表面抗原基因sag10。该球虫表面抗原基因全长708bp,编码236个氨基酸。其中有7个核苷酸与报道序列(Genbank AJ586552)有差异,涉及4个氨基酸。将sag10与转化载体pFastBac-HIS8PP连接,构建了pFastBac-sag10表达质粒,转化大肠杆菌DH10 Bac后纯化得到病毒表达载体,转染Spodoptera frugiperda(Sf21)昆虫细胞后,获得的阳性重组杆状病毒,可在昆虫细胞中表达出约35kDa的抗原蛋白SAG10。
其他文献
从新乡地区发病或死亡兔的脑、心血、肝、脾等脏器中分离病原菌,经形态学检查、生化试验、动物试验、分离菌被鉴定为多杀性巴氏杆菌。药敏试验表明,分离菌株对氟苯尼考、磺胺六甲氧嘧啶、头孢噻呋等药物较为敏感。
肌注、滴鼻和口服途经感染雏鸭,建立疾病模型,利用间接免疫过氧化物酶染色方法对感染后不同时期雏鸭组织石蜡切片中的鸭肝炎病毒进行检测。结果显示:不同途径感染雏鸭DHV后,病毒在受检样品中出现的顺序有差异。肌注组:肝脏、脾脏>肾脏、十二指肠>胰腺、肌肉、空肠>心脏、胸腺、法氏囊、哈氏腺、回肠、盲肠、直肠>肺,脑;口服组:肝脏>脾脏、肾脏>胰腺、胸腺、哈氏腺、法氏囊、肌肉、十二指肠、空肠、回肠、直肠>盲肠
根据肠炎沙门氏菌(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法。该法在SEDNA含量为9×108~9×104copies有较好的线性关系;检测SEDNA模板的灵敏度为4copies/μL,检测SE细菌数的灵敏度为6 CFU/mL;特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应。分别应用该技
本实验的主要目的是检测重组T4噬菌体经肌肉注射以后,在鸭体组织器官的分布和存留情况.首先,用小量的液体培养基培养重组噬菌体T4-VP2,再通过扩大培养、浓缩后获得滴度为2.81×1010个/ml的重组噬菌体T4-VP2。然后,用重组噬菌体T4-VP2进行动物实验。12只5d龄的小鸭分为2组:A组6只,为肌肉注射组,每只小鸭注射250uL的重组噬菌体;B组6只,为空白对照组,不作任何处理。分别在处理
测定了从我国西南三省(市)分离到的130株鸭病原性大肠杆菌外膜蛋白型(OMP型),其中O93、O92、O78和O76优势血清型53株,O46等30个其它血清型分离株77株,这些分离株共产生了4个OMP型,其中OMP-1型81株,占62.3%(81/130),覆盖O93、O92、O78和O76等29个血清型,占85.3%(29/34),为主要OMP型;根据Genbank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基
从广东某地区猪场的13份疑似猪败血性猪链球菌病、猪链球菌性脑膜炎和猪淋巴结脓肿猪链球菌病的病料中,分离纯化得到10株链球菌。通过对培养特性、形态特征、染色特性和生化特性等的观察判断,确定C群兽疫链球菌3株,D群猪链球1株,E群链球菌4株。通过药敏试验,10株细菌对先锋Ⅵ和恩诺沙星的敏感度最高;其次是阿莫西林、氯霉素、环丙沙星、青霉素、多粘菌素B、红霉素;链霉素、阿米卡星、卡那霉素、林可霉素、新霉素
首先通过酶切连接和PCR方法将信号肽SP基因与鹅细小病毒VP3基因连接,然后再利用酶切连接的方法通过在引物上加上一个由GGSGGSG 7个氨基酸组成的短肽将SP-VP3基因与鹅白细胞介素-2成熟蛋白基因IL-2c连接,从而构建成了SP-VP3-IL2c的分泌性融合蛋白基因。将该融合基因连接到乳酸杆菌表达载体pMJ67中,获得了重组的分泌性表达载体pMJ-SP-VP3-IL2c,通过电转化方法,将其
本试验根据GeneBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5端不含信号肽序列,3端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段。用限制性内切酶SnaB Ⅰ和Not Ⅰ将S1基因和裁体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl Ⅱ将表达质粒pPIC
参照GenBank中发表的鸭IL-2基因保守序列,设计了一对引物,采用RT-PCR技术从ConA刺激的四川白鹅外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出了鹅IL-2基因,并进行了克隆和测序。结果显示鹅IL-2基因全长468bp,含有一个441bp的ORF区,编码146个氨基酸.生物学软件分析表明该序列编码的氨基酸序列中有4个磷酸化位点,1个糖基化位点,含有21个氨基酸残基组成的信号肽。同源性分析表明四川白鹅
根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV-2)的核酸序列并参照表位基因预测结果,设计了1对引物,从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料和经PK15盲传的培养物中扩增出了ORF2表位基因,将其克隆到pMD18-T载体上,筛选获得了重组质粒pMD18-T-ORF2.对此基因片段进行测序分析结果表明与GenBank已提交的序列同源性为98%~99%。