亚精胺对D-半乳糖诱导成肌细胞衰老的影响

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目的:探讨亚精胺对D-半乳糖诱导成肌细胞衰老的预防作用。方法:取处于对数生长期C2C12细胞-成肌细胞,按常规消化细胞后,进行细胞计数,用DMEM-F12完全培养液调整细胞浓度为1.0×104/mL,铺于6孔板内,待6孔板中细胞长至90%左右,将其随机分为正常对照组、模型组(D-半乳糖模型组)、加药组(D-半乳糖+亚精胺)。加药组用25微摩的亚精胺干预2小时,2小时候后用含40g/L的D-半乳糖的DMEM-F12完全培养液给模型组和加药组换液,正常组用不含40g/L的D-半乳糖的DMEM-F12完全培养液换液,干预24小时候后收细胞,制样。Western blot分别检测线粒体融合分裂蛋白(Mfn2与Drp1)、能量代谢相关蛋白(Sirt1、AMPK/p-AMPK、PGC1-α)、自噬相关蛋白(Beclin1、LC3和p62)以及抗凋亡相关蛋白(BCL2)的表达量。结果:1、正常组相比,Western blot分析显示模型组Mfn2的蛋白水平显著下降,而Drp1蛋白的表达量显著上升;Sirt1、AMPK/p-AMPK、PGC1-α的蛋白水平下降;Beclin1、LC3蛋白的表达水平显著下降,p62表达水平上升;BCL2的表达水平显著下降。2、与模型组相比,Westernblot分析显示加药组Mfn2的蛋白水平显著上升,而Drp1蛋白的表达量显著下调;Sirt1、AMPK/p-AMPK、PGC1-α的蛋白水平上调;Beclin1、LC3的蛋白表达上调,p62的蛋白表达下调;BCL2的表达水平显著上升。结论:亚精胺协能有效改善衰老成肌细胞线粒体融合与分裂的动态平衡,改善异常Sirt1/AMPK/PGC1-α骨骼肌能量代谢信号通路,且激活骨骼肌自噬,抑制凋亡,从而起到对D-半乳糖诱导的成肌细胞衰老的预防作用。
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