【摘 要】
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研究目的：前期研究发现舍格伦综合征患者唾液腺细胞中存在TLR9 蛋白异常高表达,但TLR9的改变对唾液腺细胞的影响仍不清楚.本实验拟探究TLR9 信号通路的激活对唾液腺细胞自噬及凋亡的影响,并初步探究其分子机制. 研究方法：1.应用CpG Odn 激活人下颌下腺细胞系HSG的TLR9 信号通路,同时构建TLR9 过表达慢病毒转染HSG 细胞系,WB 法观察下游信号p38和JNK的磷酸化水平,评估T
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔外科
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研究目的：前期研究发现舍格伦综合征患者唾液腺细胞中存在TLR9 蛋白异常高表达,但TLR9的改变对唾液腺细胞的影响仍不清楚.本实验拟探究TLR9 信号通路的激活对唾液腺细胞自噬及凋亡的影响,并初步探究其分子机制. 研究方法：1.应用CpG Odn 激活人下颌下腺细胞系HSG的TLR9 信号通路,同时构建TLR9 过表达慢病毒转染HSG 细胞系,WB 法观察下游信号p38和JNK的磷酸化水平,评估TLR9 通路的激活情况.在上述模型中,通过WB 法观察凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达,Image J 灰度检测分析其比值；Cleaved-Caspase 3 活性检测观察凋亡因子Caspase 3的裂解情况；Hochest 染色统计凋亡细胞的数量,探究TLR9 通路激活对HSG 细胞凋亡的影响.通过WB 法观察自噬蛋白LC3B和p62的表达；mRFP-GFP-LC3B 荧光腺病毒转染TLR9 模型细胞系,激光共聚焦显微镜下观察细胞内自噬小体和自噬溶酶体的数量改变,电镜下切片观察细胞内自噬小体的数量改变,评估TLR9 通路激活对HSG 细胞自噬的影响.2.分别采用p38的抑制剂SB239063和JNK 抑制剂SP600125 处理TLR9 通路激活的HSG 细胞,采用上述方法观察p38和JNK 通路抑制后,HSG 细胞自噬和凋亡水平的改变. 研究结果：1.采用CpG Odn 激活HSG 细胞内TLR9 信号通路后,下游p38和JNK的磷酸化水平显著上调,但相关信号于6 小时后出现衰减.同时,HSG 细胞内自噬水平出现一过性上升,而凋亡水平则随时间增加而上升.过表达TLR9 同样激活了下游p38和JNK 信号通路,并使自噬和凋亡一直维持在较高的水平.2.干预HSG 细胞内p38的信号传递后,其自噬和凋亡水平相比TLR9 激活时出现了一定程度的下调.干预JNK 信号传递则明显抑制了HSG 细胞的凋亡,而其自噬水平并没有出现下降. 研究结论：本实验观察了TLR9在唾液腺细胞中异常高表达对细胞本身的影响,发现其下游p38和JNK 通路在调控唾液腺细胞自噬和凋亡时扮演着不同的角色,为靶向TLR9 进行舍格伦综合征的治疗提供新的理论依据.
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