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目的:观察温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病(SSc)皮肤成纤维细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:将30只雌性Wistar大鼠随机分为空白组、温阳化浊通络方组,每组各15只。温阳化浊通络方组:以预试验确定的10倍成人剂量温阳化浊通络方煎剂灌胃;空白组:以等量生理盐水灌胃。10d后,分别于末次灌药后30钟,采血分离血清,HPLC-MS法测定药物主要成分含量,制备含药血清和空白血清。以不同浓度的温阳化浊通络方含药血清与SSc患者皮肤成纤维细胞共同孵育,并与空白血清对照。RT-PCR测SSc患者皮肤成纤维细胞β-catenin、c-myc、Fn1、Collagen I、CTGF mRNA的表达;Western blotting测β-catenin、c-myc、Fn1、Collagen I、CTGF分子含量;TOP/FOP flash双荧光素酶报告基因实验测Wnt/β-catenin信号通路活性;蛋白免疫共沉淀实验检测β-catenin/TCF4转录调控复合物的形成。结果:与空白血清组相比,温阳化浊通络方含药血清能够显著抑制SSc患者皮肤成纤维细胞β-catenin、c-myc、Fn1、Collagen I和CTGF的mRNA和蛋白表达水平,以及TOP/FOP flash双荧光素酶报告基因活性,并且随着温阳化浊通络方含药血清浓度的提高,其抑制作用增强。更重要的是,温阳化浊通络方含药血清能够抑制β-catenin/TCF4转录调控复合物的形成,其抑制作用与温阳化浊通络方含药血清浓度呈正相关。结论:温阳化浊通络方含药血清对体外SSc患者皮肤成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路及纤维化相关标志物有明显的抑制作用,为温阳化浊通络方治疗SSc纤维化提供了科学依据。