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目的:烟雾病(moyamoya disease,MMD)最早由Suzuki和Takaku于1969年报道,因脑血管造影时呈现许多密集成堆的小血管影,似吸烟时吐出的烟雾,故名烟雾病。目前有关烟雾病的病因及发病机制还不清晰,但有证据表明,遗传因素在烟雾病(MMD)发病过程中起到了重要作用。烟雾病患者中10%-15%的MMD患者具有家族史,同卵双胞胎的MMD患病率高达80%。最近,在大规模全基因组相关性研究(GWAS)中发现了RNF213可能是导致烟雾病的第一个候选基因。本实验研究1个汉族烟雾病家系的影像学及RNF213基因的突变。方法:在知情同意的前提下,对家系成员进行神经影像学(颅脑DSA或颅脑MRA)检查。抽取家系成员中先证者(Ⅱ5)、其女(Ⅲ4)、及其兄(Ⅱ1)、其弟(Ⅱ7)、其姐(Ⅱ3)、其妹(Ⅱ9)的外周静脉血2ml,置于枸橼酸钠抗凝管中。(1)人外周血白细胞基因组DNA的提取。(2)引物设计:根据GenBank中人类RNF213基因位点rs112735431的标准序列设计引物后由TaKaRa公司合成部合成。(3)PCR反应扩增:反应体系为50μl,其中含2μl的DNA模板,上游、下游引物(浓度:10μmol/1)各2μl,Mix溶液25μl,最后加无酶水19μl。PCR扩增条件:94℃预变性5min后进入主循环,94℃变性30s,53.4℃退火30s,72℃延伸45s,30个循环后72℃再延伸7min。扩增产物由青岛华大基因有限公司进行测序。结果:先证者(Ⅱ5)MRA检查示:右侧大脑中动脉闭塞,左侧未见明显异常;DSA检查示:右侧大脑中动脉灌注未显影,颅底可见团形烟雾状血管影;左侧大脑中动脉灌注未见明显异常其妹(Ⅱ9)MRA示:右侧大脑中动脉闭塞,左侧未见明显异常;其女(Ⅲ4)MRA示:右侧大脑中动脉起始段狭窄,左侧未见明显异常。其他家庭成员颅脑MRA检查未见明显异常。按照日本卫生部下属的烟雾病研究委员会1997年制定的标准,我们发现的3例烟雾病患者均为可疑的烟雾病患者(单侧血管病变)。我们根据家族成员的患病情况绘制了系图谱。基因测序结果示:Ⅱ5、Ⅱ9、Ⅲ4三例烟雾病患者的RNF213基因的rs112735431位点均发生了突变(G→A),均为杂合型变异,基因型为G/A;而该家系中其他健康成员(Ⅱ1、Ⅱ3、Ⅱ7)的该位点没有发生基因变异,基因型为G/G。结论:本研究报道了发生在中国烟雾病家系的RNF213基因rs112735431突变,证实了RNF213基因可能是汉族人群烟雾病的致病基因。实验结果丰富了中国烟雾病基因突变数据,而且可以作为可疑MMD患者或家系的具有重要诊疗意义的基因突变位点。