合成间苯三酚重组大肠杆菌的构建与发酵

来源 :第五届全国化学工程与生物化工年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yisimple
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  在研究荧光假单胞菌生防机制中发现其操纵子phlACBD与合成间苯三酚有关,因此对荧光假单胞菌2P24基因组中phlD进行了PCR和AT克隆,并采用E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)高表达系统对phlD基因进行诱导蛋白表达。对构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)/phlD进行摇瓶发酵实验并测定
  产物间苯三酚的含量。利用HPLC方法检测发酵液中产物间苯三酚的合成,发现发酵48h产量达到最大值,间苯三酚含量为1128mg/L。
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本文建立了拟组织化培养肝细胞模型,并考察其用于药物肝毒性的可行性。结果表明,组织化培养的肝细胞毒性检出浓度接近体内肝毒性发生时相应的血药浓度,且相应的毒性机理与体内一致。而单层贴壁培养的肝细胞在数倍至数百倍于血药浓度时才能检出药物毒性,而且有时不能准确反映药物在体内的毒性机理。因此,拟组织化培养的肝细胞能更灵敏和准确地反映体内肝毒性情况,可以作为药物高通量筛选体外模型用于新药早期开发。
本文系统研究了各种醇类对大豆油醇解反应的影响,采用实验室自制的Candida sp. 99-125固定化酶,醇类包括乙醇,丙醇,丁醇,己醇和辛醇,对反应条件如水含量,酶用量,溶剂以及温度进行了优化,并对结果进行了比较。结果表明:该脂肪酶反应体系下长链醇类比乙醇有更高的反应速率和平衡转化率。
本研究从甲烷氧化菌中获取了pmmo基因原始启动子σ70,构建了σ70启动表达绿色荧光蛋白基因gfp的重组菌株E.coli.。以GFP为示踪蛋白,研究了不同Cu2+浓度对基因表达的影响。此外,通过同源重组的方法尝试了在甲烷氧化菌内通过σ70启动子表达GFP基因的可能,为进一步研究Cu2+对原始菌株内Ammo表达的调控机制奠定了基础。