胞内生物素化和量子点定点标记活病毒用于单颗粒病毒示踪

来源 :首届东湖学术论坛暨2012年武汉病毒学研究生论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wing870202
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  病毒的量子点标记及单颗粒病毒的示踪为我们揭示病毒与宿主细胞的相互作用过程提供了新的思路和方法。现在已有的标记活病毒的方法存在一些不足之处,使得我们不能在单病毒颗粒水平上进行长期的示踪。在此,本课题利用杆状病毒表达系统的特点结合改进的标记策略,在杆状病毒的囊膜和衣壳蛋白上分别标记了量子点和绿色荧光蛋白。重组杆状病毒的核衣壳在子代病毒复制过程中被标记上绿色荧光蛋白,病毒的囊膜在子代病毒胞内复制的过程中可以直接被生物素化,通过体外链霉素和生物素的一步反应在病毒囊膜上定点标记上量子点从而获得双标记的病毒。实验证实此生物化学的标记方法不影响病毒感染性。获得的双标记病毒可在单病毒水平上通过原位实时跟踪完整的病毒颗粒揭示杆状病毒内化进入宿主细胞的全过程。我们的研究首次以视频的形式展示标记的单颗粒杆状病毒与宿主细胞作用的过程。这种生物化学的标记的方法可以作为我们深入探究病毒入侵机制新的研究平台,也为研究目的蛋白在细胞内的定位和相互作用的示踪提供美好前景。
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